分子生物学遗传病基因诊断和治疗.pptVIP

名称 机制 转染效率 用途 优缺点 影响因素 磷酸钙转染法 内吞作用 20%细胞被转染 瞬时表达 1、简单有效 2、适用于贴壁、非贴壁细胞 3、常作首选方法 1、Ca2+，DNA浓度 2、PH值，沉淀反应时间 3、氯喹，甘油和丁酸钠处理 DEAE葡聚糖转染法 抑制核酸酶 内吞作用 在BDC-1，CV-1和COS细胞中较高 瞬时表达 操作简单 1、需高浓度DNa 2、DEAE葡聚糖浓度 3、温育时间 Poly-brene转染法 不清楚 低分子量DNA转染率高于磷酸钙法 CHO细胞的稳定转化子 能得到较多的稳定转化子 1、受体细胞类型 2、转染调控信号 3、DNA浓度 原生质体融合 胞膜融合 50-100%转染，稳定子得率为0.2-0.02% 瞬时表达 稳定表达 1、操作复杂 2、不能进行共转染 3、慎用于筛选营养缺陷型变异株 1、溶菌酶、PEG浓度 2、温育时间 电穿孔 高压在膜上形成微孔 效率较高 瞬时表达 稳定转化 1、需精密仪器 2、可用于动物、植物细胞和细菌 1、电场强度 2、脉冲长度 3、温度，DNA浓度 4、培养液 脂质体 脂膜融合 50-60%转染 瞬时表达 稳定转化 1、操作简单 2、可用于体内试验 1、脂质体质量 2、DNA浓度 胞核微注射法 直接注射 50-100%转染 稳定转化 1、需要特殊仪器 2、处理样品数量少 3、高效 1、注射技术 2、DNA浓度 （五）外源基因的表达及检测 　　在筛选出转化分子后还需要鉴定转导细胞中外源基因的表达状况。其中包括对目的基因和标记基因表达的鉴定。常用方法有原位杂交，Northrn杂交，NRA打点杂交，免疫组织化学染色等，前几项是检测外源基因转录出的mRNA，后者则是检测外源基因翻译出的蛋白质。 常用方法 脆性X染色体综合征 脆性X染色体综合征导致患者智障（Martin-Bell综合征），脆性X综合症是由于在人体内X染色体的形成过程中的突变所导致。在X染色体的一段DNA，由于遗传的关系有时会发生改变。一种为完全改变，另一种为DNA过度甲基化。如果这两种改变的程度较小，那么患者在临床表现方面可以没有特殊的症状或者只有轻微的症状。反之，如果这两种改变的程度较大，就可能出现如下所述的脆性X综合症的种种症状。 脆性X染色体综合征基因诊断 常用的方法： （1）PCR—ASO （2）DNA连锁链分析 （3）Southern印迹杂交法 （4）PCR扩增 成年型多囊肾病 成年型多囊肾病是一种常染色体显性遗传病，发病率高，约1000人中有1名致病基因的携带者，起病较晚，多在30岁以后，主要为肾和肝中出现多发性囊肿，临床表现为腰疼、蛋白尿、血尿、高血压、肾盂肾炎、肾结石等，最终可导致肾功能衰竭和尿毒症。 诊断：本病基因定位在16p13，与α珠蛋白基因3’端相邻，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明。因此，只能用连锁分析来进行基因的发病前诊断和产前诊断。由于通过家系分析，已证实APKD的致病基因与α珠蛋白基因3’端附近的一段小卫星DNA序列即3’HVR(3’ hypervariable region)紧密连锁，而后者在人群中具有高度多态性，因此可以通过RFLP连锁分析进行诊断。 DMD/BMD的缺失型 DMD/BMD是一种Ⅹ连锁隐性遗传的神经肌肉系统受累的致死性遗传病。DMD/BMD有70%左右为缺失型。 诊断：此基因很大，缺失可发生在不同部位，因此应尽可能采用多对引物作PCR扩增（多重PCR）来检测。如扩增产物电泳后发现有带纹的缺失，即可作出诊断并对缺失定位（图13－9），在进行产前诊断时，一般可先通过检测家系中有关成员，即确定先证者的缺失区，然后有针对性地作PCR扩增，包括缺失部分的两端，以判断胎儿或有关患儿是否也获得了相同的基因缺失，但非缺失型不能用此法查出。 脊髓小脑性共济失调 脊髓小脑性共济失调是以小脑性共济失调为主要症状的常染色体显性遗传性疾病，病理改变以小脑、脊髓、脑干变性为主，临床主要特征为小脑性共济失调，可伴有构音障碍、震颤、锥体束征以及痴呆等。 诊断：依据神经系统临床检查的程序来判断患者是否存在小脑及脊髓神经失调的临床体征，然后会查问他的家族史（包括已故的亲人），最后结合磁共振（MRI）及基因测试，排除其他累及小脑和脑干的变性病，才能判断患者是否患上脊髓小脑性共济失调。 遗传病的基因诊断 以血红蛋白病为例 血红蛋白病 血红蛋白病（hemoglobinopathy）是由于血红蛋白分子结构异常（异常血红蛋白病），或珠蛋白肽链合成速率异常（珠蛋白生成