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实验二：细胞分裂及染色 体行为观察 刘福霞 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 　　　四、实验仪器及用具 　五、药品和试剂 六、实验步骤 一、实验目的 1.掌握植物制片技术，奠定细胞遗传学的研究技 术； 2.通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过 程中染色体的形态特征和动态变化。 二、实验原理 有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。 在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。 三、实验材料 大蒜鳞茎 四、实验仪器及用具 多媒体显微演示系统、显微镜、培养箱、分析天平、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、胶水、棕色瓶等。 五、药品和试剂 浓盐酸、95%无水乙醇、0.075mol/L KCI、45%醋酸、蒸馏水，改良苯酚品红（龙胆紫或醋酸洋红） 六、实验步骤 （一）材料准备： 大蒜根尖： 将大蒜置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20-25℃光照条件下培养2-3天，待根长1-2cm时，于上午9:00-11:00剪下根尖备用。 （二）预处理 为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，处理方法如下： 根尖浸在蒸馏水中于在1-4℃低温下处理24小时。 （三）固定或前低渗 用蒸馏水洗净材料，将根尖放入0.075mol/L KCI溶液中低渗处理20分钟，然后用蒸馏水冲洗2-3次。 （四）解离 将根尖用蒸馏水冲洗2次，放入95%乙醇和浓盐酸（1?1）混合液中处理2-10分钟，取出，用水漂洗2遍。 （五）染色和制片 将解离好的材料用蒸馏水冲洗以后，转入45%醋酸中软化5-10分钟左右。取1-2根软化好的根尖放在载玻片上，用刀片切去伸长区，只留下1-2mm的分生组织。滴一滴龙胆紫染色液染色1分钟，或改良苯酚品红染色10-15分钟，或醋酸洋红染色20-30分钟。 染色完毕，取一盖玻片，盖玻片一边靠在离材料不远的载玻片上，左手握镊子顶着盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片徐徐放下，若染色液不能布满盖玻片时，可在盖玻片边缘稍加染色液，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。 （六）显微观察 制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。 （七）实验作业 1. 制作细胞有丝分裂各时期图象片子1-2张 2. 描绘显微镜下所观察到的细胞有丝分裂过程中各时期的图象，并简要说明染色体的行为特征。 （一）材料准备 （二）预处理:根尖浸在蒸馏水中于在1-4℃低温下处理24小时。 （三）前低渗:用蒸馏水洗净材料，将根尖放入KCI溶液中,低渗处理20分钟，后用蒸馏水洗2-3次。 （四）解离:将根尖用蒸馏水冲洗2次，放入95%乙醇和浓盐酸 （1?1）混合液中处理2-10分钟，取出，用水漂洗2次。 （五）染色和制片:将解离好的材料用蒸馏水冲洗以后，转入45% 醋酸中软化10分钟左右。取1-2根软化好的根尖放在载玻片上，用刀片切去伸长区，只留下1-2mm的分生组织。滴一滴龙胆紫染色液染色3-5分钟。或改良苯酚品红染色10-15分钟，或醋酸洋红染色20-30分钟。 （六）显微观察 * * * 实 验 步 骤