原核表字达系统.pptVIP

基因原核表达系统 蛋白质溶解方式调节 与溶解性高的蛋白质序列融合 如GST、Trx（硫氧还蛋白 ）、NusA 与催化二硫键形成的酶融合 如Trx、DsbA、DsbC 与信号肽融合 DsbA、DsbC 低温培养、诱导 原核表达宿主菌的选择 BL21（DE3）：为 λ DE3 溶原菌，其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。 命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶（为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物）的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。 Rosetta （DE3）： Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来，可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 * * 转录载体 翻译载体 LIC （连接非依赖的克隆） 图3.5 SCMRP基因原核表达 M：蛋白质分子量标准；泳道1：IPTG诱导BL21(DE