实验六++植物抗氧化酶活前性的测定.pptVIP

抗氧化酶与植物抗逆性关系 抗氧化酶动力学曲线 二、实验方法 1、提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨　→转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。 　 2、POD测定：取POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.90 ml，25 ℃水浴5 min，加入酶液100 ml（空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应30 s和3 min时的A470。用ε计算POD活性。 3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.8 ml， 25 ℃水浴5 min，加入酶液0.2 ml（空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和2 min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则： * * * 实验六 植物抗氧化酶活性的测定 背 景 “控制与被控制”理论 POD、SOD、CAT （AOX） （PPO） Journal of Experimental Botany, 2009，60（2）：377–390 H2O2 H2O2 李忠光，2009.10 POD 一、实验原理 Peroxidase, POD （ROS,H2O2） PPO Polyphennol oxidase, PPO 植物抗氧化酶提取和测定参考文献 POD activities = (mmol.g-1FWmin-1) PPO activities = (U.g-1FW) 4、计算