从动物肝组织因中分离、提取、.pptVIP

10级七年二班 第五组 材料的选择 因动物肝脏中的酶往往结合较多的脂质、核酸的物质，所以取饥饿24小时的动物肝脏为实验材料。 材料的预处理 细胞破碎 机械破碎法：可选用捣碎法或匀浆法。 使用匀浆法时应先将大块的组织或者细胞团用组织捣碎机或研磨器械捣碎分散。 研磨法常用于微生物和植物组织细胞的破碎故本实验不采用。 物理破碎法：冻融法、渗透压法和超声波破碎法均可。 使用冻融法应注意不能在过高的温度下操作，以免引起酶的变性失活。 使用超声波破碎法应注意操作需在冷库中进行，或将样品置于冰浴中，并采用问歇操作，如破碎30～60 s，间歇1 min，如此反复进行。 化学破碎法：常用的化学试剂有：① 有机试剂（甲苯、丙酮、丁醇、氯仿等）；② 表面活性剂（Tween、特里顿（Triton）等）；③ 螯合剂（EDTA：乙二胺四乙酸）等。他们都可以增加细胞膜的通透性，是酶容易释放。 酶溶法：因对此肝酶不了解故不采用此方法。 2.防止蛋白酶的水解作用： 预防的措施是加入蛋白酶抑制剂。常用的丝氨酸蛋白酶抑制剂有苯甲基磺酰氟（PMSF）、二异丙基氟磷酸；金属蛋白酶抑制剂有EDTA和EGTA（乙二醇四乙酸） 3.除核酸： 一般微生物和植物的粗酶液中有大量的核酸污染。除核酸的常用方法是沉淀法，沉淀剂的选择需要大量的试验来选定，已知的有1%~2%的链霉素硫酸盐、PEG、溶菌酶