09-基力因表达设计.pptVIP

基 因 表 达 基因表达 一.基因表达的基本条件 二、克隆基因的高效表达 三、原核有效表达载体的构建 四、真核基因在原核生物中表达的实现 基因表达的基本条件 一、有效转录 1、启动子(位于基因编码的上游) 2、终止子（终止信号的DNA序列） 【原核和真核不同】 二、有效翻译 1、起始密码子： （1）真核AUG (甲硫氨酸） （2）细菌AUG(n-甲酰基甲硫氨酸） GUG( val,比较少见） 2、核糖体结合位点 (SD序列）： 位于mRNA5’前导非翻译区，与16s核糖体RNA3’末端13个碱基互补。 3 、终止密码子（三个） 克隆基因的高效表达 一、强启动子 (弱起动子)： （1）原核细胞－－【－10区域，－35区域】保守，与之越接近，启动子越强。 （2）两保守序列间隔17bp序列，启动子功能最强； 二、启动子的强调控序列： （1）原核中基因调控方式：诱导与阻遏 （2）提高质粒的拷贝数，防止丢失；同时可保证不需要时，细菌生长良好。 三、SD序列及其后面碱基的成分； 四、转录终止区； 五、质粒拷贝数及稳定性 （1）Par区－－－类似染色体的着丝粒；起分