色谱分析方法资料课件.ppt

四、液相色谱流动相及其选择性 1、? 流动相的作用 在给定固定相的情况下，溶质的保留和对溶质的分离主要由溶剂的性质决定。在液相色谱中，溶剂可以是非极性的，也可以是极性的。如果与固定相的极性相比，溶剂极性小于固定相的，称这种色谱过程为正相液相色谱。如硅胶作为固定相，正己烷作为流动相的吸附色谱过程。如果与此相反，溶剂的极性大于固定相，如以ODS键合相作为固定相，水和甲醇等作为流动相的分配色谱过程，称为反相液相色谱。有的固定相，如－NH2基键合相，可以使用非极性溶剂，极性溶剂，PH2~7的磷酸缓冲液作为流动相。因此，正相与反相的概念是相对的，取决于两相极性的比较。 在液相色谱中溶剂还用来溶解样品，并用于样品的预处理中。总之，溶剂在液相色谱中是非常重要的，不应和气相色谱中的载气比较，因为后者只起携带样品的作用。 * 18年 2、? 作为流动相的溶剂性质 溶剂的种类和数目是很多的，但是可作为流动相的溶剂的数目相对来说是很少的，说明溶剂的选择在液相色谱中是比较不容易的。1－所有的溶剂；2－具有合适物理性质的溶剂；3－K’值合适的溶剂；4－值合适的溶剂 * 18年 可作为流动相的溶剂至少应该具备如下一些性质： ①、溶剂具有稳定的化学性质。它不能和固定相发生不可逆的化学反应，也不引起固定相表面活性基团的流失及基质的溶涨。除特殊的分配过程，溶剂只溶解样品，而不发生化学反应。 ②、溶剂的选择与使用的检测器要有相溶性。在使用紫外检测器时，溶剂应该在选定的紫外区没有吸收，或在溶质最大吸收波长段没有吸收。使用示差折光检测器时，溶质和溶剂的折光指数应有较大的差别，否则检测灵敏度不够高。 ③、溶剂粘度既影响系统的压降，也影响分析时间。因此使用粘度小的溶剂作为流动相在降低操作成本和加速分析时间方面具有明显的意义。 * 18年 ④ 溶剂可以从市场买到并易于纯化。在某些分析中，特别是检测灵敏度高时，溶剂的纯度要求很高，所以溶剂应易于获取并易于纯化。 ⑤ 溶剂的沸点不应太低。如果沸点太低在溶剂传输过程中易出现气泡，它将影响输送流量的精度和混合溶剂的组成。 ⑥ 溶剂的毒性应尽可能小，并不易起火。大多数溶剂对人体都是有害的，因此操作者应该注意溶剂使用中的各种安全措施。 ⑦ 成本低。使用液相色谱分离或分析样品要消耗大量的溶剂，这些溶剂使用后一般都不再回收，因此应尽可能使用低成本溶剂。 * 18年 3、? 常用的溶剂 在日常工作中比较常用的溶剂是有限的十几种，如表中列出的16种常用溶剂的性质，其它可选择的溶剂还有：异丙醇、丁醇、异丁醇、环己烷、乙醚等。 在液相色谱中不仅使用纯溶剂，更经常使用二元或多元溶剂的混合流动相，以调节流动相的洗脱强度或流动相的选择性。 * 18年 4、? 缓冲溶液和流动相添加物 在色谱分离过程中常使用缓冲溶液作为流动相，有时只在流动相中添加少量的酸，以保持流动相的氢离子浓度（PH值），提供一定的离子强度。它通过控制酸性或碱性化合物的离解度或络合物的络合常数，达到调整保留时间和分离的目的，也有助于某些化合物峰形的改善。 常用的酸是磷酸、醋酸及其它弱酸。缓冲液是这些酸和它们的盐所构成的水溶液。一般是先确定盐的浓度，通过加入酸的办法调整合适的PH值。磷酸的PH值范围为3.7～ 5.6，5.8~8.0，醋酸的PH值范围在1.8~3.5之间。选择介质和PH值除了考虑被分析样品外，还要考虑色谱系统所用的材料及固定相承受的能力。因为普通色谱系统使用的材料，包括柱管、泵和检测器等，主要是不锈钢，因此对不锈钢有侵蚀作用的酸不宜选用。以硅胶为基体的固定相，PH值在2～7之间，高于或低于这个范围，由于固定相的不稳定会失去分离效能。 流动相添加物主要指为了某些化合物的分离在流动相中添加一些物质，这些物质与被分析化合物通过共价键、氢键、偶极矩的相互作用形成各种形式的络合物、鳌合物等改变其原有的化学性质，达到分离的目的。在流动相添加手性试剂，利用非手性固定相可获得旋光异构体的分离等。在流动相中添加少量精心选择的试剂，不仅改善了某些化合物的分离，也扩大了色谱的应用范围。 * 18年 5、? 液相色谱的分离度 液相色谱过程的最终目的是实现多组分混合物的分离。色谱中用分离度（R）衡量相邻物质峰的分离程度，它的定义是 R=? ΔtR / Wb ΔtR是相邻一对物质的保留时间差（tR2－tR1），Wb是它们峰低宽度的平均值（Wb1＋Wb2）/2。R=1表明两种溶质基本被分开。R=1.5时实现完全分开。要改善分离度，最好的办法是选择合适的溶剂。 * 18年 6、? 梯度洗脱 在液相色谱分离过程中不断改变溶剂组成的方法称为梯度洗脱。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，保持好的峰形，增加溶剂