2018年蛋白质复性(苏志国).docVIP

蛋白质复性(苏志国) 　　蛋白质的折叠复性 　　　　苏志国 　　中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室 　　　　中国科学院过程工程研究所 Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences 原名：中国科学院化工冶金研究所，建立于1958年， 2001年更名 　　　　3个重点实验室（2个国家重点，1个中科院重点），1个国家工程中心 职工280人，学生360人；主要方向：生化工程，清洁化工，多相反应 　　　　生化工程国家重点实验室(1992) 国家生化工程技术研究中心（1996） 　　　　Initial investment 4 millions USD 12 professors，16 associate professors，120 students 　　　　生化工程 　　（生物化学工程，Biochemical Engineering） 　　　　生物技术 　　　　化学工程 　　　　生物技术产业化：突破瓶颈 化工可持续发展：建立新过程 　　　　研究领域 　　1980s 1990s 2000s- 　　　　医药生物技术 　　　　农业生物技术 　　生化工程 生化反应过程 　　　　工业生物技术 　　　　生物医药 生物能源 生物材料 生物化学品 其它产品 　　　　原料、辅料 ＋ 生物催化剂 　　　　生化分离过程 生化装备与介质 流程设计与优化 　　　　过程的基本规律和集成优化 　　　　美国生物技术产品销售额趋势 　　400 350 334 300 250 200 150 100 50 0 10 59 101 182 147 215 362 　　　　亿 美 元 　　　　平均增长率:20%，融资增长率：20% 就业增长率：12.5%，股市平均涨幅:8.76% 　　　　19 80 19 91 19 96 19 98 20 01 20 03 20 06 20 08 　　　　美国各类生物技术产品销售额 　　(2000年158.5亿美元) 　　16% 　　　　人治疗药 　　5% 3% 2% 　　　　诊断试剂 农 业 　　　　特殊化合物 　　74% 　　　　非医学诊断剂 　　　　资料来源：Consulting Resources Corp 　　　　100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 　　核酸药物 细胞因子 基因治疗 抗体 溶栓药物 疫苗 激素 　　　　已上市 临床中 　　　　目前生物技术的最大成功 – 蛋白质药物 　　用微生物、动物细胞生产人体药用蛋白质或疫苗 　　　　载体 DNA 　　　　人体 某种蛋白质 基因 转化 　　　　重组体 　　　　发 酵 罐 或 细 胞 培 养 罐 　　气体 　　　　克隆微生物、动物细胞 　　　　某单克隆抗体的生产线—分离纯化流程复杂 　　生物分离工段 　　　　分离纯化 占总成本 60-90% 　　　　分离纯化 　　　　举例：剪切失活 － 泵送造成蛋白质絮凝体 　　450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 　　0 20 10 30 　　　　Filtrate volume (ml) 　　　　1 mg/ml 500ml/min 　　　　No pumping 5 min pumping 10 min pumping 　　　　Membrane filtration 　　　　0.2 μ 　　　　Filtration time (min) 　　　　干 扰 素（Interferon） 　　IFN-α(IFN-β,γ, ω) 白细胞产生 165－166 氨基酸 4个半胱氨酸，两对二硫键 Cys1-Cys99；Cys29-Cys139 市场上销售前10名的生物药 　　　　Size and shape of soluble proteins 　　D.S. Goodsell and A.J. Olson, TIBS 18:3 (1993) 65-68 　　　　蛋白质药物生产的基本流程 　　基因工程细胞 　　生 物 反 应 器 离心机 　　　　膜分离器 　　　　（分离细胞和培养基） 胞内产品 细胞破碎机 　　　　碎片分离 　　　　蛋白质复性 　　　　胞外产品 　　　　成 品 　　膜分离器 (I) 层析法 (I) 层析法 (II) 膜分离器 (II) 冷冻干燥或 分装 　　　　蛋白质回收率变化范围 　　100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 　　　　低值 高值 　　　　回收率 　　　　复性 　　　　盐析 　　　　膜分离 　　　　层析 　　　　scFv57P包涵体 　　　　蛋白质的重折叠（复性） 　　（大肠杆菌表达产物） 　　显微镜下含scFv57P包涵体的 E. Coli 示意图