2018年蛋白质复性的条件及影响因素.docVIP

蛋白质复性的条件及影响因素 　　蛋白质复性的条件及影响因素 　　王 　 雪 　 宋长征 　　山东省医学科学院医药生物技术研究中心 (济南 ,250062) 　　摘要 　 蛋白质复性是一个过程 , 存在中间阶段 , 此阶段的各种相互作用力决定了蛋白质能否复性 。蛋白质复 性要求有一定的条件 , 如 pH 、 温度 、 离子强度 、 蛋白质浓度等 。另外多种添加剂能促进蛋白质复性 , 其中包括表面 活性剂 、 低浓度变性剂 、 分子伴侣蛋白和各种氧化还原对 , 但对于不同蛋白质 , 因其结构及理化特性不同 , 采取不同 复性方法 , 可以使其达到最佳复性效果 。 　　关键词 　 蛋白质 ; 　 结构与复性 　　蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分 子物质 , 易受外界条件的影响发生变性 。随着基因 工程技术的发展 , 许多实验通过将目的蛋白基因转 入原核或真核表达体系进行表达的方法 , 得到需要 的蛋白质 , 这大大丰富了蛋白质的来源 。但这些蛋 白质 , 由于表达体系本身的原因 , 或实验过程的处 理 , 多以无活性的形式存在 , 需要进行复性 。因此 , 　　步 。 　　究作一综述 。 　　1　 蛋白质的结构与复性 　　蛋白质在一定的氨基酸顺序的基础上形成非常 复杂的空间立体结构 , 其组成中的氨基酸本身的特 性是蛋白质高级结构形成的决定因素和结构基础 , 尤其是处于关键部位的氨基酸 , 对蛋白质的生物学 功能有根本的影响 , 例如镰刀型红细胞贫血症中血 红蛋白氨基酸的变化 。因此 , 能达到复性的蛋白质 变性应是在保持氨基酸的基本种类和顺序不变的基 础上 , 由于其他因素的影响而引起的分子高级结构 的变化 , 如 α2螺旋 、 β2折叠结构的增减 , 肽链的变性 舒展 , 杂乱结构的增多 , 从而使蛋白质正常的生物学 活性丧失 。 蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有 关系 , 例如含有巯基的氨基酸 , 最常见的是半胱氨 酸 , 会降低蛋白质在高温条件下的稳定性 , 尤其在某 些金属离子 ,Cu +、 Zn 2+等存在时 , 蛋白质对空气中 的氧更为敏感 , 而易发生不可逆变性 [1], 在此基础 上 , 有人通过用丝氨酸 、 丙氨酸替换活跃的半胱氨酸 的方法来提高蛋白质的稳定性 [2], 这当然要在不影 响蛋白质的生物学活性的基础上才有意义 。 脯氨酸 本身存在顺反两种异构形式 , 也会影响蛋白质空间 结构 , 某些脯氨酸异构酶在含有脯氨酸的变性蛋白 质中被证明对复性有辅助作用 。 来源于不同物种中 的同一蛋白质在氨基酸排列顺序上会存在不同程度 的差异 , 。 Wal 2 lace [3]人和乳酸杆菌的二氢 , 　　30, 　　, 其中二硫键是维系蛋白质结构完整的重要共价 键 , 二硫键的打开或错误搭配会引起蛋白质高级结 构的丧失 , 恢复二硫键结构是蛋白质复性的重要一 步 。 在蛋白质的复性过程中 , 存在一系列的结构相 似的中间体 , 这些中间体分子表面有许多疏水基团 暴露 , 对聚集较敏感 , 易于形成沉淀 。同时 , 分子内 部氨基酸之间存在使蛋白质正确折叠的天然作用 力 , 蛋白质的复性过程就是这些中间体向两个方向 选择性的演变过程 [4], 蛋白质复性效率就取决于正 确折叠和变性聚集之间的竞争 。疏水链暴露后 , 肽 链上某些具有光吸收作用的氨基酸也暴露于溶液 中 , 会引起蛋白质紫外吸收值发生一定的变化 , 根据 这一点 , 可以对变复性过程中蛋白质的结构情况进 行观察 。 蛋白质的变性过程发生是比较迅速的 , 只 要几分钟 , 但复性过程却相对较慢 , 需要几个小时 , 因此 , 复性时要给予足够的时间 。 　　2　 蛋白质复性条件 　　蛋白质的复性对环境中的理化条件有很高的要 求 , 复性时必须对温度 、 pH 、 离子强度等进行严格的 限制 , 同时蛋白质本身的性状也对复性效率产生影 响 。 朱慧等 [5]在研究重组人前尿激酶复性时 , 对不 同复性条件进行实验比较 , 发现强酸强碱均不利于 蛋白质复性 , 偏碱 (pH8. 6~8. 8) 、 低温 (4℃ ) 情况下 　　853 　　蛋白质复性较好 。蛋白质浓度对复性也有影响 , 浓 度越低 , 聚集越不易发生 [6]。原因是由于蛋白质的 浓度上升时 , 分子间相互碰撞的几率增加 , 处于中间 状态的蛋白质对聚集又较敏感 , 使蛋白质趋于凝集 而不能正确折叠 , 已复性后的蛋白质分子则不易发 生聚集 。 但是 , 实际的应用要求在高浓度下达到蛋 白质的复性 , 许多人尝试用改变实验步骤的方法来 克服这一问题 。朱慧等将复性分步进行 , 在一定的 时间间隔下分步加入蛋白质 , 给蛋白质有效的时间 进行低浓度下的复性 , 结果提高了复性效率 , 并比