植物逆境生理水孔蛋白2013.pptVIP

;;（一）植物水孔蛋白的发现 ;约翰霍普金斯大学医学院的 Agre等 (1988) 在分离纯化红细胞膜上的Rh多肽时，发现了一个28?kD的疏水性跨膜蛋白，称为 形成通道的整合膜蛋白28(channel-forming integral?membrane?protein，CHIP28)，1991年完成了其cDNA克隆。但当时并不知道该蛋白的功能。 Karl Windhage博士，将体外转录合成的CHIP28?cDNA注入非洲爪蟾的卵母细胞中，发现在低渗溶液中，卵母细胞迅速膨胀，并于5?min内破裂。 为进一步确定其功能，又将从红细胞中提取的高纯度的CHIP28蛋白整合到脂质体上，进行高渗处理，通过内部荧光物质的荧光变化来反映其体积的变化，与对照相比， CHIP28极大地增加了脂质体的透水性并 受到了氯化汞的可逆抑制，表现为很低的活化能，证实其为水选择性，并称CHIP28为Aquaporinl(AQPl)。?;表达AQPl非洲爪蟾的卵母细胞，表明AQPl在细胞膜上有水通道的功能。;;AQPl的发现后，短短几年内，在细菌、酵母、动物、植物中分离出许多水孔蛋白同源基因。 在植物中第一个水孔蛋白r-TIP是由Maure等(1993)从拟南芥中分离出来的。r-TIP的cDNA在爪蟾卵母细胞中的异源表达，证明它具有水分运输特性，属于植物水孔蛋白中的液泡膜内在蛋白(tonoplast-membrane intrinsic protein，TIP)。;（二）植物水孔蛋白的种类 ;根据通透小分子种类、可将AQPs分为两类： ⑴选择性AQP（orthodox aquaporins）：只能通透水分； ⑵多功能AQP（aquaglyceroporins）：可通透水分、甘油等其他中性小分子物质。 大部分PIP和TIP属于选择性AQP； NIP则能同时介导水、甘油等多种小分子的跨膜运输； SIP是AQP中的最小的家族，SIP1具有水通道的活性，而 SIP2则可能是其他小分子或离子的运输通道。;植物水孔蛋白主要分布在质膜和液泡膜上。 PIP与TIP之间的氨基酸同源性较低 (约50%左右)，而且PIP较TIP具有较长的N端。 水孔蛋白在植物中的含量也是相当高的。例如，萝卜的TIP占总液泡膜蛋白的40%；萝卜的PIP也占总质膜蛋白的10%；拟南芥PIP2则占总质膜蛋白的15% ；拟南芥的5种PIP1至少占总质膜蛋白的1 % 水孔蛋白在植物中有如此广泛的分布和高的含量，暗示着水孔蛋白在植物生命活动中具有极其重要的作用。;;AQP1是由四个相同的亚基构成，每个亚基的相对分子质量为28kDa，含269个氨基酸残基。每个AQP亚基为一个功能性孔道; AQP1的每个亚单位共跨膜6次，并在胞内外形成5个环(A、B、C、D、E)。A、C、E环位于胞外，B、D环及氨基和羟基末端位于胞内。在跨膜结构域2与3、5与6之间各有一个环状结构，是水通过的通道。;Pro：脯氨酸 Ala：丙氨酸 Asn：天冬酰胺 NPA：天-脯-丙;;AQPl很短的N端位于胞质侧。螺旋1穿过胞膜，通过胞外的loopA与螺旋2相连。螺旋2又顺邻近螺旋1的地方穿回膜内，并目靠近AQPl四聚体的轴心。 在螺旋2的胞质侧，loopB又折回膜内，将NPA结构放在膜的中间位置，紧接NPA结构形成螺旋HB，螺旋HB靠近螺旋6。在胞质侧，距离四聚体轴心最远的地方，HB从膜内出来和螺旋3相连接。 螺旋3在邻近螺旋1的地方穿出胞膜。LoopC位于胞外，连接着螺旋3和4。 螺旋4穿过胞膜，通过很短的靠近四聚体的loopD与螺旋5连接。 螺旋5穿过螺旋2和4的中间出膜。紧接螺旋5的loopE又从胞外折回到膜内，将NPA结构置十单体分子的中心，与loopB的NPA结构形成一个合适的角度，并且也在孔内形成了螺旋HE 。 螺旋6靠近螺旋4从膜外穿膜到膜内，其C端位于胞质侧。 ;;;;AQPl在质膜中以四聚体的形式存在，每个单体都由6个贯穿膜两面的长a螺旋构成基本骨架，其间还有两个嵌入但不贯穿膜的短a螺旋-HB、HE。;水孔蛋白中的水孔;AQP1一个亚单位的“沙漏”模型;3. 0A大小的孔径限制部位位于膜的中央；I1e60(螺旋2) ， Phe24（螺旋1) ，Leu149（螺旋4)和 Val l76（螺旋5)并排在水孔的内表面形成了一个疏水表面，并紧邻NPA结构的Asn76和Asn192。 在孔径有5. 0A的地方有两个组氨酸。His74是高度保守的，并和Glul7形成离子对。His180在选择性水孔蛋白中是保守的，但是在可通透甘油的水孔蛋白中，Gly代替了His。这表明His180对通水的选择性具有一定的作用。 孔内表面的疏水性以及很小的孔径对选择性通水可能具有至关要的作用。;AQP1和AQP2的Hg2+敏感