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白细胞 Anti-CD45 CD45 Nucleus DAPI 藻红蛋白 (PE) 变藻蓝蛋白 (APC) CTC Anti-EpCAM磁珠 Anti-CK-PE Nucleus DAPI CK EpCAM 在CellSearch?检测中，CTC 被设定为： EpCam CK-8,18 和/或19 DAPI CD45 + + + - CellSave? 储存管 CellSearch? CTC检测试剂盒 CellTracks? AutoPrep系统 磁巢Magnest? CellTracks? Analyzer II 96小时稳定 2004年FDA批准 CTC质控试剂盒 磁力捕获 CTC计数 CTC的分子特性 指示预后 快速疗效评估 辅助检测抗癌药物的反应——作为预测和/或药物动力学生物标志物 判断病人是否需要辅助化疗 检测癌症复发 辅助诊断 实时活检——肿瘤的生物学行为 阐明预后和预计的分子学特征 检测抗药情况——基于获得连续样本的便利性 提高对生物过程机制的了解 发现并鉴定新治疗靶点 * * * * * 多少年来对于肿瘤的研究迄今还没有让我们攻克癌症，但我们确实认识到的一点就是肿瘤在变。这也是众多癌症药物耐药的一个主要机制。那么CTC，循环肿瘤细胞能带给我们什么讯息呢？MD Anderson癌症中心系统生物学主任Gordon Mills在2007年接受《时代》杂志采访时这样评价CTC：我们得以直接观察肿瘤发生在DNA、RNA和蛋白质层面的变化。通过它我们发现肿瘤内部的情况。这真是激动人心的技术。 Notes are for internal training use only * Notes are for internal training use only * 离心后，各个成分被分层分离，由下至上依次是红细胞、中性粒细胞、密度梯度液和单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞、上皮细胞和肿瘤细胞），最上层是血浆。由于肿瘤细胞可能会移入血浆组分，而且如果不能立即离心会影响各类细胞的分层效果。 （ｉｓｏｌａｔｉｏｎｂｙｓｉｚｅｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＩＳＥＴ) ８μｍ孔径的聚碳酸酯膜可使较小的淋巴细胞和中性粒细胞通过，而较大的肿瘤细胞则被阻滞在膜上 Notes are for internal training use only * Notes are for internal training use only * * -Slide shows phenotype of circulating tumor cells and the Immunomagnetic Labeling and Immunofluorescent Identification of those cells CK+, EpCAM, DAPI, CD45- -Circulating tumor cells has three characteristics The first is EpCAM or Epithelial Cell adhesion molecule -CK(cytokeratin 8,18, and or 19) and an intact nucleus -Circulating tumor cells can be further characterized as seen in this example -System positively discriminates Leukocytes by using CD45 * 药物名称 检测靶标 检测内容 检测结果 预测内容 吉非替尼/ 厄洛替尼 EGFR 基因突变 野生型 耐药 突变型 敏感 西妥昔单抗 K-ras，B-raf 基因突变 野生型 敏感 突变型 耐药 伊马替尼 C-Kit 基因突变 野生型 耐药 突变型 敏感 基因多态性检测与药物代谢毒性 (UGT1A1,CYP,DPD) * * 单核苷酸多态性（SNP）是最常见的基因变异 至少1%的人群 绝大多数人群 共有序列 G to C SNP 位点 变异的序列 最常见的基因多态性 SNP * * 为什么 SNPs 重要? 个体 1 个体 2 = SNP variations in DNA SNP标志基因 A 基因 B 基因 A SNP 可能使基因 B 产生变异的蛋白质分子 * * 个体的SNP 谱 SNP 谱A SNP 谱B SNP 谱C SNP 谱F SNP 谱E SNP 谱D * * SNP 谱有助于确定药物的疗效和副作用 乳腺癌病人 个体的SNP 谱可以分成不同的类型 SNP 谱 A 对药物有期望的反应 对药物没有期望的反应 SNP 谱 A 的