PCR技术及其应用.pptVIP

第八章 PCR技术及其应用 PCR技术的建立 Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想—“修复复制” 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了…… 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现 Mullis的构思 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术 第一节 PCR技术原理和工作方式 第八章 PCR技术及其应用 一、PCR的基本原理 类似于DNA的体内复制 首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸 这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。 PCR Cycle - Step 1 - Denaturation Template DNA by Heat (95oC) PCR Cycle - Step 2 – Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequences PCR Cycle - Step 3 - At 72 o C Taq D