细胞与基因治疗.ppt

抗心律失常药物治疗的新方法  ——基因与细胞治疗 基因与细胞治疗 由于现有的治疗心律失常的局限性，近年出现了以基因工程和细胞工程为基础的心律失常治疗新方案。 基因治疗 通过对靶细胞内某基因的修复和(或)替换来增强、补充、矫正或抑制该基因异常表达, 使其表达产物即相应蛋白质的数量增加或减少, 蛋白质功能增强或减低, 从而影响疾病过程, 最终达到治疗目的。 快速性心律失常的基因治疗 治疗室性心动过速的研究集中于缩短复极时间，以防止因QT间期明显延长而导致的尖端扭转型(TdP)室性心动过速等致死性心律失常的发生。 hERG(human ether-a-go-go-related gene)基因编码延迟整合钾通道的快速成分 IKr, hERG突变可使IKr通道外向钾电流 减少, QT间期延长,易于诱发室性心律 失常。 在培养的兔心肌细胞(兔心肌细胞在体外培养几天后通常出现APD延长, EAD发生率明显增高) 中转入hERG基因, 使APD明显缩短, 相对不应期明显增加, EAD发生率下降四倍多,且能抑制电交替。 所以hERG基因可用于治疗与QT间期延长和复极离散度增加相关的室性心动过速。 缓慢性心律失常的基因治疗 1. 增强起搏细胞的变时功能 2. 生物性的起搏细胞  增强起搏细胞的变时功能 编码β2肾上腺素能受体的 质粒注入约克猪的右房的起 搏部位, 上调肾上腺素能受体 的表达。 电生理的检测显示, 心房组织 的局部过表达肾上腺素能受体 可以明显增强起搏组织的变时 效应，使现存的或病变的起搏 细胞的功能得到改善和加强。 生物性的起搏细胞 起搏离子流If是一种超极化激活的内向离子流, 它介导窦房结的四期自动除极。 超极化激活的环核苷酸门控的( Hyperpolarization activated cyclicnucleotide gated, HCN ) 通道是心脏起搏离子流If 产生的基础。 HCN基因家族的四个成员目前发现在心脏中存在的有3 个： HCN1、HCN2 和HCN4。 ECG leads I, II, and RA, and LA (overlying injection site) electrograms during normal sinus rhythm in an anesthetized dog previously injected with HCN2+GFP（green fluorescent protein） into LA (initial 2 beats). 将含有HCN2 基因的腺病毒注射入犬的左房（LA） 。 4天后进行的电生理标测发现, 当刺激迷走神经诱发出窦房结停搏后, 左房的注射部位出现了自发性的左房节律。而只注射了GFP的对照犬则无任何的自发节律。 Pacemaker function in in vitro model mHCN2转染的hMSCs影响耦合的心脏细胞的兴奋性。 综上，过表达HCN2 基因可以增大起搏电流, 使移植的心肌细胞具有起搏能力。  细胞治疗 置入体外诱导出的治疗细胞或者将干细胞作为载体, 进行基因改造。 可从以下几个层面进行心律失常的治疗： 替代心脏起搏、传导系统病变或缺失的细胞； 移植基因工程化改造的细胞, 表达某种离子通道, 和受体组织细胞耦联, 改变受体组织的电生理特性； 移植细胞通过局部分泌一些重组蛋白改变心脏的电生理环境。 干细胞是一种具有多分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，在特定的条件下可能分化为不同的功能细胞，形成多种组织和器官。 目前主要进行的是体外干细胞培养移植研究，包括胚胎干细胞（embryonic stem cell ，ESC）、骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）等。 胚胎干细胞（ESC）在体外并不仅仅分化为单个心肌细胞, 而是可以形成功能性的心脏合胞体( syncytium ), 具有稳定的起搏和传导能力, 并且对AD和ACh的刺激有反应。 但由于来源有限, 移植后可能存在免疫排斥反应, 且涉及到伦理学问题, 故有一定局限性。 骨髓间充质干细胞（MSCs）在体内植入心肌后能向心肌细胞方向分化，表达心肌