细胞生物学实验指导书(自编) (2)..docVIP

PAGE PAGE 35 《细胞生物学》（II）实验指导 学号 学院 专业 班级 姓名 二〇一三年八月 目 录 实验一 普通光学显微镜及其使用……………….…………………….……3 实验二 细胞减数分裂……………………………………………………… 8 实验三 细胞骨架的显微镜观察……………………………………………11 实验四 RNA的细胞化学——Brachet反应……………………………… 13 实验五 果蝇唾液腺细胞巨大染色体的观察………………………….……15 实验六 小鼠巨噬细胞吞噬的观察…………………………………….……20 实验七 动物骨髓细胞染色体标本的制备…………………………….……22 实验八 动物细胞融合………………………………………………….……25 实验九 人体外周血淋巴细胞培养与核型分析……………………….……29 实验十 常规组织切片制作法……………………………………….………31 实验一 普通光学显微镜及其使用 实验目的 1.理解普通光学显微镜的机械系统和光学系统的结构组成及其工作原理。 2. 熟练掌握普通光学显微镜的使用方法并进行实际操作。 一、显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 1. 机械部分 （1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 （2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 （3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 （4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 （5）物镜转换器(旋转器)：接于镜筒的下方，可自由转动，盘上有4～6个圆孔，是安装物镜部位。转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心。光路接通，即可进行观察； （6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。 （7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。 ① 粗调节器(粗螺旋)：移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。 ② 细调节器(细螺旋)：多在运用高倍镜时使用。 ? 图1普通正置显微镜结构图 ? 图2倒置光学显微镜结构图 2．照明部分 装在镜台下方，包括光源，集光器。 （1）光源：灯泡或者发光LED管。 （2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。 ①聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。 ②光圈：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光的亮度和标本的反差。 3.光学部分 （1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有2～3个，上面刻有5×、10×或15×符号以表示其放大倍数，一般装的是10×的目镜。 （2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有4～6个物镜，其中最短的刻有“10×”符号的为低倍镜，较长的刻有“20×”、“40×”符号的为高倍镜，最长的刻有“100×”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。 在物镜上，还有数值孔径(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的数值孔径如下表： 物镜 数值孔径(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.25 0.11 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。 显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10×，目镜为10×，其放大倍数就为10×10=100。 二、显微镜的使用方法 1. 光路调整 （1）首先选用“10×”物镜和“10×”目镜。 （2）把聚光镜升到顶端的位置，孔径光阑调至适中的位置。 （3）