内毒素检验讲稿.ppt

细菌内毒素试验 目的 本试验为《中国药典(二部）附录“细菌内毒素检查法”中规定的“凝胶法”，系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。 如有不能排除的干扰不适采用本试验。 细菌内毒素试验 试剂：细菌内毒素国家标准品、细菌内毒素工作标准品、鲎试剂、细菌内毒素检查用水 主要设备：超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、电热干燥箱、旋涡混合器。 试验前准备 器具处理 试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。 玻璃器皿置电热干燥箱内180℃干烤至少2 h或250℃ 干烤至少30 min。 塑料器皿置30% 双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒素检查用水充分冲洗后置60℃烘干备用。 内毒素限值的确定 输液、输血、注射器具细菌内毒素限值在产品标准中规定，宜尽可能低； 推荐输液、输血、注射器具细菌内毒素限量每件不超过20 EU； 与脑脊液接触和胸内应用医疗器械每件不超过2.15 EU。 根据每件的限值L及每件器械所用的提取液体积V，就可估算所需的鲎试剂灵敏度λ=L/V 试验前准备 鲎试剂灵敏度复核试验 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 试验步骤按《中国药典(二部）附录中“细菌内毒素检查法”规定进行。 试验前准备 供试品干扰试验 对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细 菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。 当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何可能影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰试验。 试验前准备 每种医疗器械产品应取3 批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰试验。 试验步骤按《中国药典（二部）附录“细菌内毒素检查法”中“凝胶法”规定进行。 干扰试验 Es=antilg（ Σ Xs/4）其中Xs为C溶液反应终点浓度的对数值 Et=antilg（ Σ Xt/4）其中Xt为B溶液反应终点浓度的对数值 当Es在0.5 λ至2 λ（包括0.5λ和2λ）及 当Et在0.5 λ至2 λ （包括0.5λ和2λ） 时，认为供试液浓在该浓度下无干扰作用 试验前准备 供试品如对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰 a) 使用更灵敏的鲎试剂对供试液进行更大倍数稀释; b) 采用无热原氨基甲烧缓冲液稀释供试液； c) 采用无热原氢氧化销或盐酸溶液调节供试液pH 值在6. 0~8. 0 范围内； d) 采用阳离子缓冲液(MgSO4或MgCl2)稀释供试液以调节离子浓度。 确定最大有效稀释倍数（MVD） MVD=cL/λ L为限值 c为供试品溶液浓度 试验方法 供试品数量：同一批号至少3 个单位供试品 漫提介质：细菌内毒素检查用水 试验方法 供试液制备 根据产品标准规定的细菌内毒素限值确定浸提介质体积，选用下列适宜方法制备供试液: a) 管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器具内腔，在(37±1)℃恒温箱中浸提不少于1h； B)小型配件或实体类器具置无热原玻璃器皿内，加入细菌内毒素检查用水振摇数次，在37±1℃ 恒温箱中浸泡不少于1h； 供试液贮存应不超过2h 试验方法 浸提介质体积计算公式：V=L/λ 式中： V —浸提介质体积，单位为毫升( mL); L —产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每件(EU/件) λ—所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升(EU/mL) 结果判断 37℃±1℃保温60分钟后观察结果 D管的结果均为阴性，B、C管的结果均为阳性时试验有效 A的2个平行管均为阴性时判定供试品符合规定 A的2个平行管均为阳性时判定供试品不符合规定 A的2个平行管1管阳性1管阴性时需进行复试。 复试时A液需做4管，全部阴性判定为符合规定，否则判定供试品不符合规定 试验报告 试验报告中宜给出下列信息: a) 供试品名称; b) 生产批号; c) 供试液制备方法; d) 细菌内毒素限量; e) 结果判定。 原始记录 原始记录中宜给出下列信息: a) 报告中的信息 b)细菌内毒素标准品来源与批号 c)鲎试剂来源与批号 d)细菌内毒素检查用水来源与批号 * * 2 每个浓度 均为4管 2 平行管数 ++++ ++++ - - - - - - - - 结果举例 — 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ — 稀释倍数 — 1 2 4 8 — 稀释用液 无/检查用水 D 2λ/检查用水 C 无/供试品溶液 A 内毒素浓度/被加入内毒素的溶液 编号 鲎试剂灵敏度复核 λ c=antilg（ Σ X/4）其中X为反应终点浓度的对数值 当λc在0.5 λ至2 λ（包括0.5λ和2λ）时，鲎试剂