结构生说物学6.pptVIP

第二章 结构生物学的研究方法 生物大分子的计算机模拟 X射线晶体学 电子晶体学与电镜三维重构 多维核磁共振波谱学 各种谱学方法 各种谱学方法 紫外、红外、激光拉曼、荧光、圆二色性光谱等各种谱学方法是主要结构测定方法的很好的补充，它们能给出生物大分子二级结构及一些溶液构象方面的粗略信息。 通过谱学方法可以方便、快捷地获取三维结构的运动性方面的信息，在大分子结构与功能关系的研究中有重要意义 各种谱学方法 紫外-可见差光谱 荧光探针法 圆二色谱 激光拉曼光谱 红外光谱 紫外-可见差光谱 吸收光谱的原理 紫外-可见差光谱 吸收光谱的原理 定性：吸收光谱的形状，特征吸收波长的位置 定量：比尔定律 A = lg(1/T) = abc 蛋白质的光吸收基团：酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸 差光谱：分子内的生色团经受一定环境变化时，吸收峰发生位移，吸光度和谱带半宽度也有改变，变化后和变化前的光谱差称为差光谱。 应用： 推断生色团在大分子中是隐藏的、半暴露的、还是暴露的。 蛋白质和核酸的热变性动力学研究 测定蛋白质的缔合和解离 荧光探针法 荧光光谱的原理 荧光探针法 荧光光谱的原理 蛋白质的内源荧光：来自色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，270~300 nm 有吸收，313, 350 nm 有荧光 蛋白质的外源荧光：蛋白质与荧光探针共价或非共价结合，形成发荧光的配合物。 应用： 蛋白质疏水区的探测 氨