茄子ISSR-PCR反应体系优化及验证-科学学研究.PDF

中国蔬菜 2010（24）：48-52 CHINA VEGETABLES 茄子 ISSR-PCR 反应体系优化及验证 1，2 1 1 1 1 梁任繁 王益奎 李文嘉 黎 炎 吴永官 1 2 （广西农业科学院蔬菜研究所，广西南宁 530007； 广西大学农学院，广西南宁 530004） 摘 要： 以茄子为试验材料，采用改良 CTAB 法提取茄子嫩叶总 DNA，结合单因素设计和正交设计 4 2+ L9 （3 ）的优点，探讨 Mg 、dNTP、引物及 Taq DNA 聚合酶等因素对茄子 ISSR-PCR 反应体系的影响， 利用 16 份广西茄子主要栽培品种对最优处理组合进行验证。结果表明，在 25 μL 反应体系中，含 2.5 μL -1 2+ -1 -1 10×buffer、2.0～3.0 mmol·L Mg 、0.32～0.36 mmol·L dNTP、0.4 μmol·L 引物、50 ng 模板 DNA、 0.6 U Taq DNA 聚合酶等成分，可以获得比较稳定、清晰和丰富的条带。 关键词：茄子；优化；ISSR；验证 中图分类号：S641.5 文献标识码：A 文章编号： 1000-6346（2010）24-0048-05 Optimization and Verification of ISSR Reaction System of Eggplant 1, 2 1 1 1 1 LIANG Ren-fan , WANG Yi-kui , LI Wen-jia , LI Yan , WU Yong-guan 1 2 （Institute of Vegetable, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, Guangxi, China; College of Agronomy ，Guangxi University, Nanning 530004 , Guangxi, China ） Abstract ：In this study, eggplant（Solanum melongena L.）was the test material. The total DNA was extracted from its fresh young leaves by modified CTAB method. The advantage of orthogonal design and single factor design were applied to optimize ISSR-PCR amplification system of eggplant in 4 factors, 2+ such as Mg , dNTP, primer and Taq DNA polymerase at 3 levels, and the optimal treatme