第2章—实验室设备及培时养条件.pptVIP

* * 1 光照强度?? 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。 光照强度：1000lx—1500lx 黑暗条件：利于细胞、愈伤组织的诱导增殖 光照条件：利于器官的分化 ?百合珠芽：在红光下培养8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，十几周后才出现愈伤组织，唐菖蒲子球块：接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 杨树：对愈伤组织生长红光促进蓝光阻碍 * * 2 光质 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响 ??? 研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，如葡萄，茎切段培养在短日照下形成根。 * * 3 光周期 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗 （三）湿度 1.容器内湿度水平主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。 * * 湿度的影响包括培养容器内湿度的保持和环境的湿度条件 * * 2.环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。 （四）渗透压 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。 * * （五）pH值 不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的, 大多在5—6.5左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多数植物培养的需要。PH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。 * * 以硝态氮作氮源比以铵态氮作氮源PH值较小一些 一般来说pH值高于6.5时，培养基会变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低pH值（约0.2-0.3个pH值）因此在配制时常提高pH值0.2-0.3单位。 pH值大小调节可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl来调整。1ml的NaOH可使PH值升高0.2单位，1ml的HCl可使PH值降低0.2单位。调节时一定要充分搅拌均匀。 * * （六）气 体 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。 固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。 培养室要经常换气，改善室内的通气状况。 液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。 * *  复习思考题 (1)因地制宜建一个组织培养实验室，需要哪些分实验室?各分室的作用是什么? (2)常规组织培养时，需要什么设备和器械?怎样使用? (3)组织培养中，pH值起什么作用?如果pH值过高或过低会有什么后果? (4)如何根据外植体的不同调整适宜的培养温度? * *  * * 第二章 实验室设备和培养条件 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。 * * 第一节 实验室设计 植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 * * 实验室的大小取决于工作的目的和规模： 1.以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产影响效率。 2. 在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计,避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。 一、标准的组织培养实验室 洗涤室（准备室） 配置室 灭菌室 接种室 培养室 观察室 * * * * 1.准备室 器具的洗涤、干燥、消毒 配置室 进行药品的保存、配置、消毒、分装 3.灭菌室 培养基及使用器具的消毒与灭菌 * * 准备室的设置及配备 * * 4. 接种室