胶原蛋白都的制备与鉴定.pptVIP

;;一、引言;;动物皮的水解产物利用;二、提取;胶原蛋白的分子结构单元是原胶原。 原胶原为细长的棒状分子，由三条肽链构成。每条肽链由1000 个以上的氨基酸残基构成，不含色氨酸，其中脯氨酸是胶原特有的氨基酸。胶原蛋白中甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸含量高，不能形成α 螺旋或β 折叠片结构，而是形成以三条称为α 肽链或α 链的多肽链（亚基）缠绕成特有的三股螺旋。虽然各种类型的胶原蛋白都具有相似的螺旋结构特征，但组成胶原蛋白的各α多肽链的结构有很大的差别。;以Ⅰ 型胶原为例，其一级结构，胶原中含有较为伸展的左手螺旋区段以及非螺旋区段，在螺旋区段中则呈现出了（Gly- X- Y）n（其中X，Y 代表非甘氨酸）的周期性排列。 二级结构则由三条呈左手螺旋的肽链形成的右手大螺旋（如右图所示）。三股螺旋分子间以一定间距、呈纵向对称交错排列形成原纤维，再聚集成纤维，然后形成更大的纤维束。 ;2.2、胶原蛋白的提取;（1）酸法提取;采用该法能有效胡提高提取率，但只能 得到相对分子量较小的胶原蛋白水解产物，应用价值并不太高。与其他提取法相似，提取时间的延长在一定范围内可以使提取率增加。 ;（3）酶法提取;（4）影响因素分析;2.2.2、分离;2.2.3、提纯;三、胶原蛋白的鉴定;胶原蛋白的定量分析;; 光吸收法 由于蛋白质含有芳香族氨基如色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tgr)，故在280nm有吸收最大峰。用280nm光吸收值可定量测定该种蛋白质的量，但是每种蛋白质中的芳香族氨基酸含量不同，故采用280nm光吸收为1时，吸光度等于1mg/mI来计算另由于核酸类杂质在280nm也有光吸收为了排除其扰．采用280nm和260nm光吸收值用下式计算蛋白质浓度(mg/mI)=145A～074A。最难确定的方法是用蛋白质的摩尔吸光系数计算精确称取1mg～10mg已恒重过的纯蛋白的样品.配成1mg／mI浓度的样品．测其在280nm下的光吸收值可得出该蛋白质的克分子消光系数光吸收法，测定迅速用量少不消耗样品故被广泛采用．但必须注意该法仅适用于纯蛋白样品。;其他方法;2、蛋白质的纯度鉴定;等电点;;四、结束语;此外,如下几点也需引起重视: