基因工程跟基因重组资料.pptVIP

您已经掌握基因克隆的主要步骤！ 分离目的基因和载体DNA。 用合适的酶切割上述两者，产生匹配的末端。 连接酶将目的基因装入载体。 转入细菌。 筛选具有抗药性克隆。 4. 聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） PCR 的基本原理 体外高效、快速、特异地扩增目的基因或DNA片段的技术。 其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件——模板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA变性、复性及延伸的温度与时间等，使目的DNA得以迅速扩增 DNA模板变性 与体内DNA解链过程不同，PCR中作为模板的双链DNA是通过95℃左右的高温使其发生变性，形成单链DNA 模板与引物退火 PCR通常需要两条寡核苷酸链作为DNA合成时的引物（primer）,这两个引物分别与待扩增模板DNA的目标片段两端的序列互补。在降低温度的过程中，通过控制退火条件，引物就能准确地与扩增区域的两端配对。 ⑴引物短，不易缠绕； ⑵设计的引物是与模板DNA两端序列互补； ⑶引物的量远大于模板分子的量，引物与模板DNA形成双链的几率远远高于DNA分子自身的复性。 引物延伸 在PCR反应体系中的DNA聚合酶，能够催化反应体系中游离的单核苷酸（dNTPs）由引物5→3方向，按碱基配对的原则延伸，形成两条与模板DNA互补的复制链