欧文氏杆菌CXJZ95—198基因组文库构建.PDFVIP

文章编号：1671—3532(2006)04—0176—06 欧文氏杆菌CXJZ95—198基因组文库的构建 张运雄。刘正初‘ (中国农业科学院麻类研究所，湖南长沙410205) carotovora 摘要：采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效茵种Erwinia CXJZ95—198的基 因组文库，结合透明圈法，筛选到了8个甘露聚糖酶基因阳性克隆，并采用PCR方法对它们进行了 分析鉴定，结果表明它们含有同一个甘露聚糖酶基因。 关键词：Erwiniacarotovora；基因组文库；甘露聚糖酶基因 中图分类号：$563．192 文献标识码：A 生物法精制草本纤维能克服传统和常规方法的诸多弊端，是草本纤维高效利用的发展方向。中 国农业科学院麻类研究所在苎麻、红麻、亚麻、罗布麻等原料的生物脱胶和龙须草、红麻、麦草等原 料的生物制浆方面开展了大量的研究，取得了显著的进展。该所选育的欧文氏杆菌CXJZ95—198 (Erwiniacarotovora)能在6—8小时完成苎麻等原料的纤维提取，具有较好的研究和利用价值。 酶学研究表明，该菌种具有较高的果胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶酶活，而且这些酶的最适pH 值近申性n。3】，在食品、饲料等加工领域具有较好的应用前景。因此，对该菌种进行非纤维素降解的 分子生物学研究，特别是关键酶基因的克隆具有重要的理论意义和实用价值。 本研究是通过建立欧文氏杆菌CXJZ95—198基因组文库，采用透明圈法，筛选甘露聚糖酶基 因阳性克隆，以克隆和研究该菌种甘露聚糖酶基因，并用该文库克隆该菌种的木聚糖酶基因、果胶 酶基因。 l 材料与方法 1．1 试验材料 1．1．1 茵种和戢体 裹1 本研究所用的曹种与载体 Tab．1Strainsandvectorsinthe study 菌种或载体 特性 来源 兰!翌!竺竺熊!!!塑垡 ．塑璺塑 Q塑竺 EcarotovoraCXZJ95—198 高效草本纤维提取菌种 本室选育、保存 EcoliDI-ISa laeZAMl5)hadRl7本室保存 SupE44△laeUl69(币80 fecalendA tiff—lrelAl lgyrA96 pUCl8 氨卞青霉素抗性Takara DNA pT系列pUCl8BamHI位点插入CXT_jSau3AI部分酶切片断 Novagen (pTl—12) 1．1．2 试剂 BamHI，‰RI，Hind PCR聚合 酶购自深圳东盛生物技术公司，T4 DNA连接酶购自深圳维宏(Weihong)生物技术公司，质粒提取 试剂盒购自博大泰(BioDev)，DNA凝胶回收试剂盒购自北京天工(Tiangen)生物技术公司。 收稿日期：2006—06—08 作者简介：张运雄(1964一)，男。副研究员，博士。 基因登录号(GenBanK)DQ36440 ★通讯作者：ibfelzc@public．cs．hn．ca 万方数据 ANDPRODUCTS 177 2006年第28卷第4期中凰麻业PLANT,FIBERS 槐豆胶(Sigma)，phagek胁n砜Ⅱdigest(Takara)，lkbDNA 由成都路特生物技术公司赠送。其它化学药品均为市售