Apollon反义核酸促进肝癌HepG2细胞凋亡机制的探讨.PDF

检验医学２０１３年９月第２８卷第９期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１３，Ｖｏｌ２８．Ｎｏ９． ·８４５· 文章编号：１６７３８６４０（２０１３）０９０８４５０６　　中图分类号：Ｒ４４６．６２　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１３．０９．０２７ Ａｐｏｌｌｏｎ反义核酸促进肝癌ＨｅｐＧ 细胞凋亡机制的探讨 ２ 黎毓光，　何金花，　王　莉，　谢杏仪，　陈顺仪，　陈武嘉，　黄国贤 （广州市番禺区中心医院检验科，广东 广州５１１４００） 　　摘要：目的　研究凋亡抑制蛋白（ＩＡＰ）家族成员Ａｐｏｌｌｏｎ反义核酸（ＡＳＯ）对人肝癌ＨｅｐＧ细胞增殖、凋亡的 ２ 影响，并探讨其机制。方法　将化学合成的ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ经脂质体包裹后作用于肝癌 ＨｅｐＧ细胞４８ｈ，采用 ２ ＷＳＴ８法检测不同浓度的ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ对肝癌细胞增殖抑制作用，实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ＰＣＲ）检 测细胞ＡｐｏｌｌｏｎｍＲＮＡ的表达水平；流式细胞术检测细胞早期凋亡率；Ｈｏｃｈｅｓｔ３３２５８染色观察 ＨｅｐＧ细胞凋亡 ２ 形态；线粒体膜电位检测细胞凋亡；比色法测定半胱氨酸蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９）活性的改变；蛋白质免疫 印记技术检测细胞色素Ｃ蛋白的表达水平。结果　ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ转染ＨｅｐＧ细胞４８ｈ能明显抑制细胞增殖，并 ２ 呈浓度依赖关系。ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ能促进ＨｅｐＧ细胞凋亡。不同浓度的ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ能显著下调ＡｐｏｌｌｏｎｍＲＮＡ的 ２ 表达水平，同时Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９的活性明显增加，细胞色素 Ｃ蛋白表达水平也增加。经荧光显微镜观察， ＡＳＯ组可见核高强度荧光的细胞，并见凋亡小体。结论　ＡｐｏｌｌｏｎＡＳＯ可下调 ＡｐｏｌｌｏｎｍＲＮＡ表达水平，抑制 ＨｅｐＧ细胞增殖，其诱导细胞早期凋亡可能通过线粒体介导的途径。 ２ 关键词：反义核酸；Ａｐｏｌｌｏｎ；增殖；凋亡；ＨｅｐＧ细胞；肝癌 ２ 　　ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒＨｅｐＧ ｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡｐｏｌｌｏｎａｎｔｉｓｅｎｓｅ ２ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ＬＩＹｕｇｕａｎｇ，ＨＥＪｉｎｈｕａ，ＷＡＮＧＬｉ，ＸＩＥＸｉｎｇｙｉ，ＣＨＥＮＳｈｕｎｙｉ，ＣＨＥＮ Ｗｕｊｉａ，ＨＵＡＮＧ Ｇｕｏｘｉａｎ．　（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＰａｎｙｕＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１１４００，Ｃｈｉｎａ） 　　 Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎ（ＩＡＰ）Ａｐｏｌｌｏｎａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ＡＳＯ）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａ