胶体金免疫试验析 .docVIP

胶体金免疫试验探析 　　一、胶体金免疫结合试验的检测原理 　　胶体金免疫结合试验的检测原理是以微孔滤膜为载体,包被已知抗原或抗体,加入待检标本后,经滤膜的毛细管作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合,再通过胶体金结合物达到检测目的。根据检测装置的不同可分为金免疫渗滤试验(GIFA)和金免疫层析试验(GICA)。 　　1·GIFA:GIFA始于1985年[1],最初以酶作为标记物。1989年发展了以胶体金为标记物用于检测艾滋病病毒抗体的渗滤试验[2],确立了GIFA的基本技术。GIFA试剂盒有2个主要成分:一是金标抗体结合物,另一是渗滤装置。该装置为一充满吸水垫料的塑料小盒,在盒盖中央的小孔下面放置了一片硝酸纤维素膜,膜上预包被抗原或抗体斑点。试验时将标本滴加在膜上,通过渗滤使抗原抗体在膜上发生免疫结合反应;再滴加金标结合物,使其与对应抗体抗原结合并显色。阳性结果在膜上出现着色斑点。 　　GIFA检测操作步骤与酶联免疫吸附试验(ELISA)法相同。差别在于加样、反应和洗涤均通过渗滤完成。检测全过程仅需数分钟,但敏感度却与需数小时完成的ELISA相仿。其原因在于:ELISA样品中的待检抗原需缓慢地扩散才能与吸附于固相表面的抗体反应,而在膜渗滤法中,抗体充满了膜的微孔,待检液体层层渗滤时抗原抗体紧密接触形成免疫浓缩,从而提高了反应效率。另外,以胶体金作为标记物,不但减少了操