动物染色体标本制备与观察.pptVIP

动物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、作业 一、实验目的 1. 掌握动物骨髓细胞染色体标本制备基本过程，了解各个操作步骤的原理。 2. 了解常用实验动物染色体的数目及特点。 二、实验原理 凡处于增殖状态的细胞，或者经过处理进入分裂的细胞即可用于染色体分析。在动物的各种组织中，骨髓是不断分裂的组织之一，是细胞遗传学研究的好材料。 进行染色体观察、分析，需要选择处于分裂中期的细胞。给动物注射一定量的秋水仙素即可使许多处于早期分裂相的细胞停滞于中期。 三、实验步骤 加完固定液后，立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀,静置固定10min， 1500r/min离心10 min ，弃上清液。如此反复固定1次，离心10 min。 固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底细胞多寡加入1--2ml新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液。 ★ 在干净、湿、冷的载玻片上滴2--3滴上层细胞悬液，自然干燥（滴片）。 将玻片标本插入吉姆萨染液中，染色5 min。 用小烧杯盛蒸馏水略洗，再用吸水纸擦干玻片标本底面和四周，显微镜观察和分析。 四、作业 绘制染色体图并作简要分析。 例如：细胞密度是否适中，分裂细胞的比例如何，处于分裂中期相的细胞数量情况，染色体形态、数目、有否重叠等。 * 动物按30μg/g体重的剂量经腹腔注射秋水仙素，7—8小时后杀死蛙，取后肢股骨和胫骨，剥掉全部肌肉，剪去股骨和胫骨两端。 ★ 用注射器将 6ml 1%柠檬酸钠溶液通过针头注入骨髓腔，冲出骨髓细胞至小碟内，直至股骨变为白色为止。摘掉针头，用注射器轻轻反复吸打，使分散成单个细胞。 将骨髓细胞转入离心管，以1500r/min离心8 min，弃上清。 ★在离心管中加入事先预热至30℃的0.4% KCL溶液5ml，将沉淀轻轻吹散，置30℃水浴中低渗30min。 以1500r/min离心8 min。弃上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇:冰醋酸(3:1)固定液5ml，加固定液时注意不要冲动细胞团块。 青蛙骨髓细胞染色体核型（2n=26） 滴片的制作 1m 蛙应至少提前7--8小时进行秋水仙素的注射，3000μg/ml，将300mg（0.3g）秋水仙素溶解于100ml任氏缓冲液中即可，100g的蛙注射1ml，110g注射1.1ml………以此类推，200g的蛙注射2ml。 仪器 每个小组需要培养皿一套、10ml量筒一个、小烧杯一个、注射器一支、15ml离心管一个（由于好的实验结果要留下滴片，所以全年级的试管要提前全部备好）。 全班需低速离心机两台。每四人一组需水浴锅一个，边台需水浴锅一个。 试剂： ①1%的柠檬酸钠溶液（每个小班次500ml）；②0.4%的kcl溶液（用量少，全年级500ml），在讲解实验的过程中，置于30℃水浴锅内预热；③固定液=甲醇：冰醋酸3：1（注意：需要新进行配制，并分装到四人/每组）；④Giemsa染液，配制可见YHM主编79页；⑤秋水仙素，3000μg/ml，将300mg（0.3g）秋水仙素溶解于100ml任氏缓冲液中即可。 注意： 1.载玻片应提前清洗，首先选择新的载玻片，在洗涤剂中清洗后，两次蒸馏水漂洗，然后放入75%的酒精浸泡过夜，再置于蒸馏水中放于4 ℃冰箱内保存。 2.教师滴片时应佩戴手套，防止醋酸腐蚀。 3.注射牛蛙前应先将牛蛙用水洗净，然后用抹布擦干，捏住蛙的两端，头略微向下，以免注射时碰到内脏，再将针头插入蛙体内约1cm左右即可注射。 * * * 蛙应至少提前7--8小时进行秋水仙素的注射，3000μg/ml，将300mg（0.3g）秋水仙素溶解于100ml任氏缓冲液中即可，100g的蛙注射1ml，110g注射1.1ml………以此类推，200g的蛙注射2ml。 仪器 每个小组需要培养皿一套、10ml量筒一个、小烧杯一个、注射器一支、15ml离心管一个（由于好的实验结果要留下滴片，所以全年级的试管要提前全部备好）。 全班需低速离心机两台。每四人一组需水浴锅一个，边台需水浴锅一个。 试剂： ①1%的柠檬酸钠溶液（每个小班次500ml）；②0.4%的kcl溶液（用量少，全年级500ml），在讲解实验的过程中，置于30℃水浴锅内预热；③固定液=甲醇：冰醋酸3：1（注意：需要新进行配制，并分装到四人/每组）；④Giemsa染液，配制可见YHM主编79页；⑤秋水仙素，3000μg/ml，将300mg（0.3g）秋水仙素溶解于100ml任氏缓冲液中即可。 注意： 1.载玻片应提前清洗，首先选择新的载玻片，在洗涤剂中清洗后，两次蒸馏水漂洗，然后放入75%的酒精浸泡过夜，再置于蒸馏水中放于4 ℃冰箱内保存。 2.教师滴片时应佩戴手套，防止醋酸腐蚀。 3.注射牛蛙前应先将牛蛙用水洗净，然后用抹布擦干，捏住蛙的两