基因工程基本操作程序3.pptVIP

12．（2008山东）为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的_____处，DNA连接酶作用于_______处。（填“a”或“b”） （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_____________法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用____________________技术，该技术的核心是________________和_________________。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______________做探针进行分子杂交检测，又要用________ 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 * 温故而知新 目的基因 启动子 终止子 标记基因 基因表达载体 导入方法 受体细胞 微生物 动物 植物 受体生物 受精卵 或体细胞 受精卵 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射法 将目的基因导入不同细胞的方法 常用法：Ca2+处理法 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 四、目的基因的检测与鉴定 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: ② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针； ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中。 （一）检测 基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原-抗体杂交 ②过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。 提取 抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 个体生物学水平的鉴定 有没有更直观的方法？ 没有抗虫基因 的棉植株 有抗虫基因的棉植株 棉铃虫 虫没有死 虫被杀死 没有表达 目的基因表达 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等。 个体水平鉴定 是否成功显示出杂交带 抗原—抗体杂交 目的基因是否翻译出蛋白质 第三步 是否成功显示出杂交带 分子杂交技术 目的基因是否转录出mRNA 第二步 是否成功显示出杂交带 DNA分子杂交 目的基因是否进入受体细胞 第一步 分子检测 结果显示 方法 检测内容 步骤 类型 目的基因的表达和检测 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 转化法（微生物）、农杆菌转化法（植物）、显微注射法（动物） 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 目的基因 移栽到盐碱地