19 符合GLP规范毒性病理学研究体系.pptVIP

产生药物毒性的各种影响因素 　遗传因素（种族差别、系统差别） 　动物的年龄、月龄、周龄 　动物的体重 　性别因素 　健康状态 　饲料因素（质和量） 　毒性物质的摄取方法 　环境因素（温度、湿度、饲养方法等） 　季节的因素 毒性的综合判断和分析 影响病变诊断的死后变化和人为误差 正常组织 病变 (对病变的漏检及误诊) 死后变化，固定不好 染色性的下降，细胞及核的萎缩 细胞、组织的基本结构的消失 人为误差 剖检：脏器摘出时的损伤 取材、包埋：组织的分离和脱落，其他组织的混入等 切片、染色：切片，展片及染色不好等 小结：建立GLP体制下的毒性病理学评价体系 建立标准的解剖、制片等技术方法 建立病理学标准术语和诊断标准 建立人员培训和资格认定组织体系 建立技术评价和认定组织体系 建立符合GLP 标准的背景数据、标本资料保存系统 血管紧张素抑制剂引起的肾脏损伤 暂时标本的保管 (湿标本、蜡块和切片) 暂时标本应在指定的位置、由专人保管、进行相应记录， 直到试验结束后归档为止 暂时标本应包括：湿标本、蜡块、切片、记录等 毒性病理背景数据的积累和总结 脏器重量：各脏器的绝对重量、相对重量 组织学所见：自发病变、诱发病变 血液细胞：细胞分类 骨髓细胞：细胞分类 生殖细胞：不同发育期的、各层次生殖细胞 不同动物种属的、不同生育年龄阶段的 背景数据的积累！ 按照GLP标准进行操作和记录 Tests are conducted in accord with SOPs Records are signed and audited 新药审评中常见的关键性问题 GLP体制下毒性病理学的规范性问题 制片技术性问题 病理学术语及诊断的问题 病理学总结报告的问题 承担病理学诊断人员的资格 Peer review的问题 肝脏左外侧叶沿长轴取材 肾脏左侧取横断面，右侧取纵断面 膀胱最大纵径处取材 心脏在主动脉弓处切开，剖面可见心脏的四个腔室 肺 脑 各脏器组织取材的要求: 01 肝脏 02 03 04 05 肾脏 膀胱 心脏 肺 06 脾脏 胸腺 07 甲状腺 08 气管 09 脑垂体 10 胃 切片中组织排列和方向 固定剂固定后的组织，要经过固定后处理才能切片。这些处理步骤包括冲洗或漂洗，脱水，透明，媒浸及包埋。 自动脱水机标准程序设定：根据动物种属分别设定时间、温度 小鼠 大鼠 大动物（狗和猴） 脱水、透明温度：34℃ 37℃ 40℃ 浸蜡温度： 62℃ 63℃ 63℃ 70％乙醇 1小时/过夜 1小时/过夜 1.5小时/过夜 80％乙醇 1小时 1小时 1.5小时 3) 95％乙醇 1小时 1.5小时 1.5小时 固定后的处理： 切片前准备： 锋利的切片刀（通常装在刀架上） 充足的载玻片 恒温烤片装置 恒温水浴展片箱（40℃） 优质狼毫毛笔 蜡块：放入冰箱（－18℃）中冷却 切片制作过程: 蜡块固定在切片机上 粗修、薄切、展片、捞片、烤片、封蜡 石蜡切片的制作要求： 苏木素伊红（HE）染色的要求： Harris苏木素染液 伊红染色液 0.5%盐酸酒精 染色基本流程：脱蜡－水化－染细胞核－ 分化－染细胞浆－脱水－透明－封片 溶液使用期限 自动染色仪染色时间设定 骨组织染色时间设定 一只大鼠的全部脏器 骨髓涂片制作的要求： 取骨髓：大鼠通常取胸骨上部横断面 狗和猴通常取胸骨横断面 涂片：用止血钳将骨髓挤出，滴在载玻片的一端， 用另一张载玻片迅速推片 固定：充分干燥后，用甲醇进行固定 染色：通常用瑞氏和姬姆萨（Giemsa）染色液染色 原液的稀释液（1/10） 显微镜下分色 骨髓涂片的质量对比： 常用的特殊染色方法 过碘酸雪夫氏反应(PAS)：糖原、中性粘液性物质等 阿尔辛蓝过碘酸雪夫氏反应(AB-PAS)：酸性粘液性物质 Mallory氏磷钨酸苏木素染色(PTH/PTAH法)： 心肌、骨骼肌 PAS-桔黄