分子生物学与生物化学实验操作设计与技能(1).pptVIP

5、侥幸心理 侥幸心理是分子生物学实验中致使实验人员犯错误最多的原因，想省时间、省步骤及因对前一步实验盲目自信是产生这种心理的主要原因。因为分子生物学实验方法是在依据分子生物学基础理论的基础上，辅以前人大量的实验经验而建立的，实验条件的细小改变，不一定会使实验失败，但几个步骤的细小改变，累积起来必出大错，做分子生物学实验每个步骤的结果，在能够检测的情况下都应检测，否则不应进入下一步实验。由于各种原因，实验人员经常省略检测这一步，从表面上看省了事、实际上使后面的实验失去了保证，最后实验失败而且连原因都找不出，对重做实验也无补益。结果是花费更多的时间。还浪费了宝贵的样品和试剂。例如某人从克隆载体上分离基因，限制性内切酶酶切后没有检测是否切动、是否完全，即进入电泳分离基因，电泳完在紫外光下收割基因片段时，才看到载体DNA根本没有切断，只好重做。还有的人在前面的情况下，抱一种侥幸心理，认为可能会有少量基因切下，在基因DNA电泳应出现的位置割胶分离，将假想分离到的基因直接进行克隆;，当然这些人的侥幸心理是有基础的，因为基因DNA分子太少，在EB染色中是看不到的，但这样做实验成功的机会甚微，从我们实验室统计的情况看，花的时间成倍地多。总之，侥幸心理是导致实验失败最大的原因，是实验人员最忌讳的事，所有的人都应加以杜绝。我们建议实验人员充分安排好实验，严格按照每一实验步骤的要求操作。当实验中出现没有把握的情况时，应停止实验，寻找原因加以克服，或找有经验的同行解决问题，直到有把握再进入下一步实验。我们之所以在这里一再强调这一点，是因为这方面犯错误的人太多太多，有经验的和没经验的人都不例外。 （二)操作问题 在分子生物学实验中，经常要进行微生物学方面、生物化学方面及仪器方面等等的操作，不了解这些操作的要求，也会影响实验人员的实验工作，甚至可能使实验室造成重大损失，所以每个实验人员进入实验室时，必须参阅有关的书籍，或请有经验的人员演示说明，方可开展实验。另外要着重说明的一点是做标签，由于实验室做实验的人员通常都很多，每人自己的样品较易与他人的样品混淆，自己的样品之间太多时也易混淆;许多样品需要保存的时间较长，到时可能找不到，所以手头的样品、试剂应随手标好。标签应写明样品名称、日期和配制人姓名，应牢靠、不能模糊。 （三)试剂问题 在分子生物学实验中，要用到多种试剂，并且对试剂的要求十分严格，主要表现为:1． 试剂等级不够，如应该用分析纯的误用了化学纯;2． 试剂配制不当，如有的化学试剂结晶体，含有水分子， 在称量时没有扣除它的份额，配制的试剂浓度过低;3． 除菌条件不对，某些试剂应过滤除菌，另一些试剂应高温高压灭菌;4． 试剂污染，如称量时，取用试剂时，别人污染时都可能造成污染;5． 试剂储存时间过长，如测序用的丙烯酰胺胶母液，在4℃条件下只 能存放一个月;6． 试剂保存不当，如有的试剂应保存在-20℃下，另一些试剂则只能 在室温下保存。所以实验人员在配制试剂时，要严格按各个特定试 剂的配制要求来操作。 (四)背景知识问题 第一是对研究课题的背景知识了解不够。实验人员不知道实验要解决何种问题，怎样解决问题，不知道采用何种技术路线最有效地解决问题，这一现象是很严重的;第二是对具体的实验原理不懂，以至不能正确地分析实验现象，不能灵活地解决实验中遇到的问题。我们建议实验人员尽可能多地占有有关课题的背景资料，详细地阅读和理解有关的实验资料。 (五)安全问题 在分子生物学实验中，实验人员经常要接触到一些对人体有害的实验试剂，如溴化乙锭、丙烯酰胺、放射性同位素等，它们或者可能诱发癌症，或者对人神经系统产生累积毒害。因此，为了实验人员的人身安全，每一个人都应严格按照实验安全操作的有关要求进行操作。另一个问题是，实验室经常要使用煤气、水及电器，煤气泄漏导致爆炸或人员中毒死亡，实验室水龙头未关，下水道堵塞造成实验室水灾，实验室人员触电等时有发生，所以每一个实验人员在离开实验室时都应注意检查水、电、煤气，有关用电设备都应按操作说明使用，以防止不必要的人身意外伤亡。 分子生物学实验成功的关键 稳定的心理素质、正确而精准的实验技术、良好的实验习惯，是实验获得成功的关键。！ 实验室基本注意事项 一、新生进入实验室后必须做好的几件事情: 1、实验记录本，上面写清楚日期每天的实验内容，操作步骤、结果.如 果结果不好，应试着分析并写出原因以便以后参考。需要拍照的照 片，必须当时拍完，并编好文件日期妥善保存（格式一般是 *.tif）。如果犯了很不应该的错误,必须在实验记录本上注明,下次 不要再犯同样的错误. 2、有自己专用的实验样品盒，盒子放在冰箱的固定位置并且在盒子上面 用标签纸或记号笔