甘蔗全长丙酮酸磷酸二激酶PPDK基因的克隆-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１０）：８７～９２ 甘蔗全长丙酮酸磷酸二激酶（ＰＰＤＫ）基因的克隆  杨福明　徐德昌 　侯爱菊 （哈尔滨工业大学食品科学与工程学院　哈尔滨　１５００９０） 摘要　和 Ｃ植物相比，Ｃ植物具有明显的生长优势及水分和营养利用率，生物产量也较高。甘 ３ ４ 蔗是典型的Ｃ作物之一。以甘蔗叶片提取的基因组ＤＮＡ为模板，以ＧｅｎＢａｎｋ公布的甘蔗ＰＰＤＫ ４ 基因ｃＤＮＡ序列设计引物，进行ＬＡＰＣＲ（ＬｏｎｇＡｃｕｔｅＰＣＲ）扩增。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＭＤ１８Ｔ载 体中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，测序，得到了１３．５ｋｂ的甘蔗全长ＰＰＤＫ基因序列。为方便后续实验， 在引物中引入可利用的ＸｈｏＩ和ＮｏｔＩ酶切位点，将全长ＰＰＤＫ基因分两段克隆到ｐＭＤ１８ＴＳｉｍｐｌｅ 载体中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，完成了甘蔗全长丙酮酸磷酸二激酶（ＰＰＤＫ）基因的完整克隆，为将 其导