表达猪2 型圆环病毒orf2 基因重组伪狂犬病病毒构建及鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(8):1716-1722 Scientia Agricultura Sinica 表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的 构建及鉴定 琚春梅，陈焕春，郗 鑫，刘正飞，曹胜波 (华中农业大学动物医学院，武汉 430070) 摘要：【目的】以伪狂犬病病毒为载体，构建表达猪2型圆环病毒ORF2 基因的重组病毒，并研究其生物学特 性。【方法】将猪 2 型圆环病毒 ORF2 基因插入到伪狂犬病病毒 gG 缺失通用转移载体中，构建猪 2 型圆环病毒-伪 狂犬病病毒重组中间转移质粒，然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK- - + /gG /LacZ 基因组共转染IBRS-2细胞，待发生细 胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。【结果】利用检测PCV2 ORF2基因和LacZ基因的PCR 方法筛选到重组病毒 TK- - + /gG /ORF2 ，同时用 Southern blotting 证实外源基因 PCV2 ORF2 已成功插入到 TK- - + /gG /LacZ 亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验（IFA）和Western blotting结果显示重组病毒中PCV2 ORF2 基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明，重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当， 且重组病毒对小鼠无致病性，免疫小鼠后可诱导机体产生抗 ORF2 蛋白的特异性抗体。【结论】重组伪狂犬病毒构 建成功，且表达的ORF2蛋白具有免疫原性。 关键词：猪2 型圆环病毒；ORF2基因；伪狂犬病毒；TK- - + /gG /ORF2 ；鉴定 Construction and Identification of a Recombinant Pseudorabies Virus Expressing ORF2 Gene of Porcine Circovirus Type 2 JU Chun-mei, CHEN Huan-chun, XI Xin, LIU Zheng-fei, CAO Sheng-bo (College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070) Abstract: 【Objective 】In this paper, a recombinant virus expressing ORF2 gene of PCV2 using pseudorabies virus as vector. 【Method 】The ORF2 gene of porcine circovirus type 2 was inserted into the universal transfer vector deleting gG of pseudorabies virus to generate the recombinant transfer plasmid. The genomic DNA of PRV TK- - + /gG /LacZ strain and pgGORF2 were co-infected - - + into