《GBT14931.2-1994-畜禽肉中已烯雌酚的测定方法》.pdfVIP

GB/T 14931.2—1994 中华人民共和国国家标准 畜禽肉中己烯雌酚的测定方法 Method for determination of diaethylstilbestrol in flesh GB/T 14931.2— 1994 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱（HPLC）方法测定畜禽肉中己烯雌酚残留。 本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。最小检 出限 1.25 ng（取样 5 g 时，最小检出浓度 0.25 mg/kg）。 2 原理 样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入 HPLC 柱中，经紫外检测器鉴定。于波 长 230 nm 处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一 定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。 3 试剂 使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需过 0.5 umFH 滤膜，无机试剂需过 0.45 um 滤膜。 3．1 甲醇 PO ·2H O）取 1 g 磷酸二氢钠溶于水成 500 3．2 0.043 mol/L 磷酸二氢钠 （NaH 2 4 2 mL。 3．3 磷酸 3．4 己烯雌酚 （DES）标准溶液：精密称取 100 mg 己烯雌酚 （DES）溶于甲醇， 移入 100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含 DES1.0 mg，贮于冰箱 中。 3．5 己烯雌酚（DES）标准使用液：吸取 10.00 mLLDES 贮备液，移入 100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含 DES100 ug。 4 仪器 4．1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。 4．2 小型绞肉机。 4．3 小型粉碎机。 4．4 电动振荡机。 4．5 离心机。 5 操作方法 5．1 提取及净化 称取 5 g（±0.1 g）绞碎（小于 5 mm）肉样品，放入 50 mL 具塞离心管中， 加 10.00 mL 甲醇，充分搅拌，振荡20 min，于 3000 r/min 离心 10 min，将上 清液移出，残渣中再加 10.00 mL 甲醇，混均后振荡 20 min，于 3000 r/min 离 心 10 min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心 10 min，取上清液过 0.5 umFH 滤膜，备用。 5．2 色谱条件 5．2．1 紫外检测器检测波长 230 nm。 中华人民共和国卫生部中华人民共和国卫生部 1994—01—241994—01—24批准 19批准 1994—08—0194—08—01 实施实施 GB/T 14931.2—1994 5．2．2 灵敏度：0.04 AUFS。 5．2．3 流动相：甲醇：0.043 mol/L 磷酸二氢钠；70/30，用磷酸调 pH=5 （其 中NaH PO ·2HO 水溶溶液需过 0.45 um 滤膜）。 2 4 2 5．2．4 流速：1 mL/min。 5．2．5 进样量：20 uL。 5．2．6 色谱柱：CLC-ODS-C18（5 um）6.2 mm×150 mm 不锈钢柱。 5．2．7 柱温：室温。 5．3 工作曲线绘制 称取 5 份 （每份5.0 g）绞碎的肉样品，放入 50 mL 具塞离心管中，分别加 入不同浓度的标准液（6.0,12.0,18.0,24.0 ug/mL）各 1.0 mL，同时做空白。 其中甲醇总量为 20.00 mL，使其测定浓度为 0.00,0.30,0.60,0.90,1.20 ug/mL， 按 5.1 处理方法提取备用。 5．4 测定 分别取样 20 uL，注入 HPLC 柱中，可测得不同浓度 DES 标