酪氨酸及其某些重要衍生物毛细管电泳分离与检测.pdfVIP

酪氨酸及其某些重要衍生物的毛细管电泳分离与检测 1 陈国南*, 石焱芳 教育部食品安全分析与检测技术重点实验室（福州大学），福州大学 化学系，福州，福建，350002 E-mail: gnchen@ 摘要： 采用毛细管电泳紫外检测法（ CE-UV ），对酪氨酸及其某些重要衍生物酪 胺、对羟基苯丙酮酸、尿黑酸以及含酪氨酸残基的活性肽 Tyr-Arg, Tyr-D-Arg 和 Tyr-Gly-Gly 等七种生物物质进行了分离分析研究，考察了运行缓冲溶液的 pH 与浓度，分离电压，进样时间 , 不同添加剂及其浓度等对 CZE 分离的影响， 在优化条件下七组分在 20 min 以内达到完全基线分离。并将该优化方法直接 用于尿样中七种组分回收率及精密度的测定，结果令人满意。 关键词 ：毛细管电泳，紫外检测，酪氨酸及其某些重要衍生物 1 引言 酪氨酸是生物体内不可缺少的氨基酸，也是构成蛋白质的常见氨 基酸之一，主要存在于血液中，是合成 非蛋白含氮物质（如甲状腺素， 儿茶酚胺，黑素）的前体 [ 1 ] 。酪氨酸在体内的分解代谢途径如图1所 示 [ 2 ] 。首先在肝内酪氨酸转化酶催化下，酪氨酸转变成对羟基苯丙酮 酸，对羟基苯丙酮酸经过对羟基苯丙酮 酸羟化酶的作用，同时引起侧 链丙酮酸的氧化脱羧和转移以及苯环邻 位的羟化，生成尿黑酸，该反 应需要抗坏血酸作为辅酶并消耗分子氧。尿黑酸在尿黑酸氧化酶催化 下氧化生成顺丁烯二酰乙酰乙酸，并经异构酶作用转变为延胡索酰乙 酰乙酸，最后在相应的水解酶 作用下水解为延胡酸及乙酰乙酸。另外 酪氨酸在体内可经酪氨酸脱羧 酶的催化转变成酪胺。 酪氨酸及其分解代谢产物在正 常的生理代谢过程中会保持一定 的相对稳定水平，缺乏酪氨酸人体就会出现生长异常 ,智能低下等现 象，对于某些有酪氨酸代谢先天缺陷的 患者，往往表现为血液或尿液 中酪氨酸及其分解代谢物的某些指标异常。因此酪氨酸及其分解代谢 1 本文得到教育部博士点基金（项目编号：20040386002 ）资助 1 产物含量的高低可以作为临床上诊断先 天性代谢疾病的标记物，研究 开发简便，快速和灵敏的分析方法对于这些标记物的测定有助于这类 疾病的临床确诊和治疗。 由于酪氨酸和酪氨酸的某些代谢物，如酪胺、对羟基苯丙酮酸、 尿 黑 酸 ， 以 及 一 些 含 酪 氨 酸 的 活 性 肽 Tyr-Arg, Tyr-D-Arg 和 Tyr-Gly-Gly ，它们的分子结构中都含有一个容易氧化的酚基[3] ，如 表 1 所示。很多的文献报道集中于它们的电化学研究 [4-7] ，其中以酪 氨酸的电化学研究开展得最多 [4,5] 。高效液相色谱电化学检测也是分 析这类物质的常用方法 [8-14] ，此外还有一些其它的方法如，流动注 射化学发光法用于测定酪氨酸 [1] ，荧光猝灭法用于测定对羟基苯丙 酮酸 [15]等。 图 1 酪氨酸的分解代谢路径 2 高效毛细管电泳由于具有高的分离效率，快速，简便以及样品需求量 少等特点使其在复杂物质的分离分析中 发挥了越来越重要的作用。本 文采用 CE-UV 检测技术，对七种酪氨酸及其重要衍生物的毛细管电 泳行为开展研究，首次建立了 分离测定这些化合物的新方法。 表 1 酪氨酸及其衍生物分子结构式 Compounds abbreviation Structure