生物化学酶催化机制.ppt

（2）三维结构的研究 酶的三维结构决定了酶的功能，如果得到酶的三维 结构信息，对酶的催化机制的研究提供最直接的线索 。获得酶三维结构的方法有X射线衍射和NMR。 （3）定点突变 分子生物学技术的发展使对蛋白质定点突变变的很 容易，所以只要得到一个酶的基因，就可以对其氨基 酸序列进行任意的突变。如果对一个酶氨基酸残基进 行有的放矢的突变，会对酶的作用机制研究提供有价 值的信息。把胰蛋白酶活性中心裂缝底部的Asp189突 变成不带电荷或带正电荷的氨基酸残基，胰蛋白酶活 性完全丧失。胰蛋白酶只水解碱性氨基酸残基与其他 氨基酸氨基形成肽键，所以Asp189通过侧链的负电荷 与底物上的碱性氨基酸残基带正电荷的侧链结合。 （4）动力学分析 动力学分析可以为研究酶的作用机制提供有用的数 据。 （5）化学修饰 用双功能试剂对酶的修饰有助于确定在三维结构上 相邻的基团。借助底物或竞争性抑制剂的保护，可以 通过化学修饰确定活性中心的氨基酸残基的性质。 例：假定一个酶分子上有6个Csy残基，但又无法确 定它的活性中心是否有或者有几个Csy残基，可以分 别在有或无过量底物存在下，用碘代乙酸修饰酶，然 后进行对比，在底物保护的情况下，不能被修饰的 Csy残基就在活性中心。 ΔG活为反应活化能HA-HB-HC为过渡态中间物。过渡态中间物既不是产物，也不是底物，而是介