二甲基亚矶对P19细胞体外分化为心肌细胞的影响.PDFVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2007 , 29: 579-584 二甲基亚矶对P19 细胞体外分化为心肌细胞的影响 尹青陈炜赵呈李莉张雷*龚森 (河北医科大学组织学与胚胎学教研室，石家庄050017) 摘要 体外应用不同浓度二甲基亚矶(dimethyl sulfoxide, DMSO)诱导P19 细胞向心肌细胞 分化，通过免疫细胞化学、流式细胞、 RT-PCR 方法检测α- 横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin , α-SA)、心肌肌钙蛋白 T (cardiac troponin T , cTnT)及GATA-4、 α- 肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain， α-MHC) mRNA表达。结果显示， DMSO 处理结合悬浮培养可诱导部分P19 细胞分化为节 志 律}J~动的心肌细胞，分化的细胞α-SA、 cTnT 表达阳性，同时表达心肌特异GATA-4、 α啕MHC mRNA. 1.0%DMSO纽α-SA、 cTnT 阳性细胞免疫荧光强度及GATA-4、 α-MHC mRNA表达水平 杂 明显高于0.5% 及0.8%DMSO 组。表明 DMSO 的诱导作用与其浓度有关。 学 关键词 P19 细胞;心肌细胞;二甲基亚枫 物 志 缺血性心脏病是一种常见疾病，己成为人类疾病 大学细胞中心)按常规方法培养。取对数生长的细 生 杂 死亡的第一杀手。心肌缺血引起损伤区心肌细胞的 胞，分别用含DMSO 浓度为 0.5%、 0.8% 及1.0% 的 胞 大量不可逆性缺失、存活的功能性心肌细胞数量下 分化培养基分散细胞，调节细胞密度为0.25xl06个/ml 学 降等，这些因素最终导致心功能衰竭的发生，这己成 接种于铺有琼脂的培养皿中(0 天)， 7 天后形成细胞聚 细 为心血管疾病死亡的主要原因。近年来，细胞移植 集体。将细胞聚集体接种于24 孔培养板中(每孔中 物 己成为心血管疾病治疗领域中的热点。如何获得大 1-2 个聚集体)，用不含DMSO 的生长培养基继续培 生 量可供移植的心肌干细胞并进行移植，是人们面临的 养。 主要问题。 P19 细胞是从小鼠畸胎瘤中分离得到的 1.2 倒置显微镜观察细胞跳动情况 胞 具有多分化潜能的干细胞，通过条件培养其可在体外 从DMSO诱导后l 天开始，每天用倒置显微镜观