第15章 蛋白质合成..pptVIP

5S rRNA的二级结构 5S rRNA对核糖体活性是必需的，可是它的作用仍不十分清楚。很可能当核糖体执行功能时，它与16S rRNA相互作用，与已知的真核生物的5S rRNA与18S rRNA相互作用相类似。 15.2 原核生物的翻译过程 (1) 氨基酸的活化 (氨基酰-tRNA的形成) 两步反应过程：第一步是氨基酸与 ATP 作用, 形成氨基酰腺嘌呤核苷酸； 第二步是氨基酰基转移到 tRNA 的 3-OH 端上, 形成氨基酰-tRNA。 氨基酸活化的总反应式是： 氨基酸 + ATP + tRNA + H2O 氨基酰-tRNA + AMP + PPi 氨基酰-tRNA 合成酶 每一种氨基酸至少有一种对应的氨基酰-tRNA合成酶。它既催化氨基酸与 ATP 的作用, 也催化氨基酰基转移到 tRNA。 氨酰-tRNA (2) tRNA对密码子的辨认 在翻译中氨基酸是不能识别密码子的，而是靠tRNA的反密码子来识别。反密码子与密码子反向排列，按碱基互补配对的原则来识别，即密码子的第1、2、3碱基分别与反密码子的3、2、1碱基相配对。Crick提出存在摇摆假说。 tRNA反密码子中的I 可以与A、U、或C 配对 U或C或A I U或C G A或G U U A G C 密码子的3′端碱基 反密码子的5′端碱基 反密码子与密码子碱基配对的“摆动” 所有细菌蛋白质合成的第一个氨基酸都是N-甲酰甲硫氨酸（fMet）。 两种tRNAMet：tRNAfMet，tRNAmMet；只有tRNAfMet上的氨基酸可以甲酰化； Met-tRNAfMet fMet-tRNAfMet 转甲酰酶 N10-甲酰四氢叶酸 (3) 翻译的起始 1) 起始氨基酰-tRNA形成 所有tRNA受体臂最后一对碱基中，只有tRNAfMet 的没有配对； tRNAfMet 反密码臂上有一系列G-C 对，可使fMet-tRNAf 直接插入P 位点。 起始从30S 亚基、fMet-tRNAfMet、和一个mRNA分子的复合物开始； 然后加入50S 亚基，形成70S 核糖体; 只有fMet-tRNAf可被30S 亚基用于起始； 其它氨酰-tRNA可被70S核糖体用于延长。 起始密码子AUG上游约10 bp处有一段 5′ ... A G G A G G ... 3′ 序列，称为S-D序列 (Shine-Dalgarno序列)， 与16S RNA 3′的 3′ ... U C C U C C ... 5′ 互补。 2) 起始密码子的正确选读 3) 起始因子(IF) 蛋白质合成的启动必须有起始因子参加，形成核糖体- mRNA- tRNA三元复合物。 起始因子：蛋白质合成起始阶段特异地与小亚基结合的蛋白质。 (Initiation factor) IF-3 为30S特异地结合在mRNA起始位点所需； IF-2 结合于起始tRNA，控制其进入核糖体； IF-1 作为起始复合体一稳定因子，没有专一功能，只能促进IF-2 及 IF-3 的活性，有些原核生物无IF-I。 50S亚基加入，释放起始因子。 形成30S-mRNA复合体； IF-2-GTP加入，结合在P位点； 起始tRNA加入；IF-2保证只有起始tRNA参与起始反应； 步骤： （形成70S复合物） 大肠杆菌核糖体中翻译起始的途径 1)氨酰基-tRNA进入“A位” 蛋白质合成中，每向肽链中加入一个氨基酸时，需与核糖体周期性结合的蛋白因子(延长因子 )。 EF-Tu：帮助氨酰-tRNA进入A位点； EF-Ts：使 EF-Tu 恢复活性； EF-G： 参与核糖体移位。 (3)肽链的延长 EF-Tu-GTP将氨酰-tRNA带入A位点，然后以EF-Tu-GDP离开； EF-Tu唯一不能识别的fMet-tRNAf 氨酰基--tRNA进入A位 2) 肽键的形成 肽酰转移酶（peptidyl transferase）是50S 亚基的一种活性，催化形成新的肽键，同时使与 P 位点 tRNA 连接的肽链转移到与A位点的tRNA。 肽键的形成 3) 核糖体的移位（translocation） 核糖体沿 mRNA 前进三个核苷酸。无载荷 tRNA 排出 P 位点，而原来位于A 位点的肽酰tRNA进入P 位点，空出 A 位点。 核糖体移位的杂合状态模型 移位过程需要延长因子EF-G（也叫移位酶）的推动。 移位过程需要延长因子EF-G（也