细胞工程植物史细胞培养2.pptVIP

植物细胞制备 机械法 酶法 愈伤组织诱导法 不断继代培养愈伤组织，通过流体剪切力和振动，使植物细胞从结构非常松散的愈伤组织中释放出来，得到悬浮的植物细胞 植物细胞分离 --悬浮培养系建立 调节培养基组分 疏松的愈伤组织 在液体培养基中继代培养若干次 建立稳定的悬浮培养植物细胞系 植物细胞培养的人工环境物理因素 光 ：光照时间与光照强度视具体的植物细胞的生理特性而定 温度：通常在25?C-28 ?C之间 pH ：5~6之间 氧：好氧 植物细胞培养与次生代谢 类似于青霉素的生产，大多植物有效成分积累与细胞生长非关联，而往往在细胞生长达平衡时开始 次生代谢物积累于细胞胞内的液泡中，分离提取首先需要破碎细胞 培养基 一、无机盐 二、碳源 三、植物生长激素 四、有机氮源 五、有机酸 六、复合物质 植物生长激素 2,4-D ： 10 to 50 μM NAA ：1 to 50 μM Kinetin ：0.1 to 10 μM IAA：0.1 to 10 μM 提高次生代谢物产量的策略 高产细胞系的建立和选择 ： 克隆选择、抗性选择和诱导选择 组织化培养 ： 根系培养 固定化细胞技术： 凝胶包埋法、吸附法 产物促进释放技术 ： 改变培养基组成、电刺激法、二甲基亚砜（DMSO）类物质的化学渗透法、由培养基与萃取剂组成的双液相培养 植物细胞培养产物 ——药品及生物活性物质 生物碱Alkaloids 吗啡楠碱Morphinan alkaloids 小檗碱 Berbeirine 莨菪烷Tropane alkaloids 强心苷Cardinolides* 毛地黄毒苷是一种强心苷类。毛地黄细胞培养物能够进行植 株所不能够或能 极微量进行的生物合成过程。 抗癌化合物（Antitumor compounds） 喜树碱Camptothecin Homoharringtonine 鬼臼毒Podophyllotoxin 紫杉醇（Taxol） 西洋参（Ginseng）* 迷迭香酸Rosmarinic acid 对苯二酚葡糖苷Arbutin 植物细胞培养产物 ——食品添加剂Food additives 色素 Pigments?????? ? 紫草宁?shikonin compounds*???????花青素?Anthocyanins $1,250-2,000/kg 红花黄色素，红花素carthamin 是其主要成分 藏红花Saffron 茜草色素Madder Colorants 其它 糖胶树胶Chicle （口香糖树胶） 香豆素 紫草宁的生产（1） 悬浮紫草细胞的制备 采用种子萌动法诱导紫草愈伤组织 紫草种子在25?C黑暗中萌动，然后转移于LS培养基进行固体培养，激素水平为2,4-D10-6mol/L，KT 10-5mol/L。一星期后在芽的下端产生了乳黄色愈伤组织。 紫草宁分泌 愈伤组织若在固体LS培养基上进行继代培养，并将激素改为添加IAA，4周后可发现细胞变为深红色，此物质即紫草宁 悬浮细胞系建立 将愈伤组织继代培养在液体LS培养基中，经多次培养后可得到悬浮的小颗粒细胞（几个到几十个细胞聚集团） 紫草宁的生产（2） 紫草宁的生产（2）发展与开发历史 日本三井石油公司 ： 确定生长-生产两阶段培养 流加高密度培养 育种，高产细胞株筛选 1983年750 L气升式反应器 1987年，1m3的转鼓式反应器 中国： 南京大学生物系 浙江大学材料与化工学院 人参（Panax ginseng ）细胞 有效成分 皂甙（saponins ）和皂甙配基（ sapogenins ） 研究与开发历史 1 日本Meiji Seika Kaisha 1973年专利 大规模培养反应器 后放弃 2 美国University of Minnesota 发现2,4-D 和 kinetin对细胞生长与次生代谢有着不同的调节作用 3 日本Nitto Denko Corporation 80年代中期 20