种子学实验4-纯度PAGE-西北农林科技大学农学院.pptVIP

种子检验学实验 马守才 博士/副教授 西北农林科技大学农学院 Email:mashoucai@nwsuaf.edu.cn 种子学 实验三 ISTA小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种纯度 一、目的要求 (1)了解种子醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的原理。 (2)掌握具体电泳方法。 * 二、实验原理 从种子中提取的醇溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应和电泳分离的电荷效应组成作用下得到良好的分离，通过显色显示蛋白质谱带类型。不同品种由于遗传不同，种子内所含的蛋白质种类有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对品种真实性和纯度进行鉴定。 * 三、材料和用具 （见实验过程） 四、方法和步骤 1．样品醇溶蛋白提取 逐粒磨碎小麦种子样品，放入离心管 然后加入样品提取液，每管小麦加入0.2mL 室温下将其浸提一夜 加样前用5 500r／min，离心15 min。 * 2．安装制胶器 3．灌制分离胶和插入样品梳 吸取凝胶液20 mL，放入烧杯; 加入15 μL 10％APS和5 μL TEMED，迅速摇匀，倒入凝胶玻板之间，马上插好样品梳。 * 4．加样 小心平衡地拨出样品梳，然后用微量进样器吸取醇溶蛋白提取液。6-10ul * 5．电泳 将电极缓冲液稀释10倍。取80mL电极缓冲原液，加无离子水稀释到800mL，分别注入前槽和后槽。