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季胺-辣根过氧化物酶-过氧化氢显色新体系及其在酶活性检测中的应用
2007 年第 65 卷 化 学 学 报 Vol. 65, 2007
第 15 期, 1499～1503 ACTA CHIMICA SINICA No. 15, 1499～1503
·研究论文·
季胺-辣根过氧化物酶-过氧化氢显色新体系及其在酶
活性检测中的应用
李建国 刘 颖 鞠熀 先*
(生命分析化学教育部重点实验室 南京大学化学系 南京 210093)
摘要 建立了光度法测定辣根过氧化物 (HRP)活性的季胺-过氧化氢-HRP 新体系, 探讨了反应机理. 该方法基于含
KI 的pH 4.5 PBS 介质中, HRP 催化 H O 氧化季胺[二(4–二甲氨基苯基) 甲烷] 的显色反应在 462 nm 处的吸光度. 吸光度
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与 HRP 活性呈线性关系. 该可溶性的季胺比目前临床常用显色剂 3,3,5,5- 四甲基联苯胺更稳定, 克服了后者的缺点.
在选定的实验条件下, 测定 HRP 的线性范围为 2.0 ×10－9～2.5 ×10－7 g/mL, 检出限为 3 ×10－10 g/mL. 应用于 HRP 标记
马抗人甲胎蛋白免疫标记物的测定, 结果满意. 该方法操作简便, 灵敏度高, 在临床上有较好的应用前景.
关键词 光度酶联免疫法; 辣根过氧化物 ; 过氧化氢; 季胺; 二(4-二甲氨基苯基) 甲烷
A Novel Tetrabase-horseradish Peroxidase-H O Spectrophotometric
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System and Its Application to Detection of Enzyme Activity
LI, Jian-Guo LIU, Ying JU, Huang-Xian*
(Key Laboratory of Analytical Chemistry for Life Science (Ministry of Education of China),
Department of Chemistry , Nanjing University, Nanjing 210093)
Abstract A new spectrophotometric system of tetrabase [bis(4-dimethylaminophenyl)methane]-H O -
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horseradish peroxidase (HRP) was developed for the detection of HRP activity, and th
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