地高辛字标记系统.pptVIP

杂交液组成 5×SSC (NaCl，柠檬酸钠) 50mM PB (NaH2PO4，Na2HPO4) 5×Denhardt (多聚蔗糖，聚乙烯比咯烷酮，BSA) 2.5mmEDTA （有/无） 100ug/ml SS DNA (鲑精DNA) 0.1%SDS 10%硫酸葡聚糖（dextran sulfate） 杂交 预热一定体积的DiG Easy Hyb（10ml/100cm2膜）至杂交温度37-42 oC 。 预杂交30分钟。在不加探针的情况下，仅将膜放在杂交液中42 oC下充分润湿。（此过程可以延长至数小时） 变性：Dig标记的探针（约25ng/ml）加50μl H2O置沸水浴或98 oC干浴锅中5分钟后迅速放在冰上冷却。（不能用碱变性！） 将变性的探针加入预热的DIG Easy Hyb（3.5ml/100cm2）中，混匀，避免泡沫。 倒出预杂交液，加入探针和DIG Easy Hyb混合液。 继续在42 oC下杂交6h 至过夜（单拷贝探针）。 备注： 含有探针的DiG Easy Hyb杂交液可重复利用，杂交结束后放入离心管中于-20 oC保存，可重复使用几次，只需在使用前于68 oC处理10分钟即可 不要煮沸DiG Easy Hyb杂交液 杂交时注意事项 使用正确的杂交温度（使用DIG EasyHyb，DNA：DNA37—42oC，RNA：RNA 68oC，RNA：DNA 50oC