苜蓿草粉豆粕混合蛋白质饲料利用率的体外酶解适宜条件研究.PDF

苜蓿草粉豆粕混合蛋白质饲料利用率的体外酶解适宜条件研究 周群，玉永雄，刘景环，康红军 （西南大学，重庆高校草食动物工程研究中心，重庆牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400716） 摘要：利用木瓜蛋白酶体外水解苜蓿草粉与豆粕混合物，结果表明：最佳酶解条件为酶 用量 0.02%，水解时间为 10 小时，水解温度为 65℃，得到了用木瓜蛋白酶水解部分苜蓿草 粉替代豆粕蛋白质饲料的最佳酶解工艺。 关键词：木瓜蛋白酶；苜蓿；豆粕；水解；蛋白质 蛋白质是生命过程的重要物质,占动物机体固形物总量的50%左右。因此，饲料中蛋白质 的供应对畜禽维持生命和进行生产具有重要的作用。而当今世界饲料蛋白质缺乏,来源受到 限制,大豆蛋白作为应用最广泛的植物性饲料蛋白质资源,已显示出其明显的重要性，而其价 格也高涨不下[1]。苜蓿因其具有的高蛋白质含量而被许多国家大面积推广种植,优质苜蓿干 草的粗蛋白含量通常在20%以上（干物质基础），几乎高于所有的禾本科干草、玉米青贮以及 作物秸秆。[2]研究表明,苜蓿含有动物所需要的各种必需氨基酸,而且含量丰富、品质好,限 制性氨基酸特别是赖氨酸含量丰富。鲜草中赖氨酸含量与玉米相当,而干草中赖氨酸、色氨 酸、胱氨酸等含量比玉米籽实高3～5.7倍。蛋氨酸、酪氨酸、组氨酸含量相对较少,除此外 苜蓿还含有其它一些稀有氨基酸,如瓜氨酸等[3]。苜蓿氨基酸组成比例较为均衡，且苜蓿价 格较低，部分替代豆粕可以降低饲料成本，提高养殖户的经济效益，是一种解决植物性蛋白 质缺乏的有效途径。 不同蛋白质的氨基酸组成与空间结构不同，在动物体内的消化吸收率也大不相同。当蛋 白质被水解为小肽和游离氨基酸后，其吸收利用率大为增加[4]。因此，为了充分利用好蛋白 质资源，对蛋白质进行水解是十分必要的。以蛋白质为原料，水解制取氨基酸的方法有酸水 解法、碱水解法和酶水解法3种。酸水解法水解虽彻底，但条件剧烈，色氨酸全被破坏，丝 氨酸、酪氨酸和苏氨酸被部分破坏；水解液需经过中和及脱盐处理，工艺路线长，能耗高， 设备腐蚀大，营养成分损失多。碱水解只能得到消旋化的氨基酸，羟基氨基酸、巯基氨基酸 全被破坏；且造价高，设备腐蚀严重，营养成分损失也大。酶水解法反应条件温和，操作简 单，能保留更多的营养成分，且水解过程易控制，不会造成大的环境污染[5~6]。 因幼畜消化道较短，自身产生的蛋白酶不足，对蛋白质的利用不完全。本试验的目的是 在饲喂前对饲料原料进行预处理，使蛋白质在体外分解为小肽和氨基酸后，再进入动物体内， 提高其对蛋白质的吸收和利用效率，提高生产性能。在酶解法的基础上，结合王文亮、王利 民[2]确定的底物用量、木瓜蛋白酶消化温度和时间、最适酶解温度，研究体外酶解部分苜蓿 草粉与豆粕混合物以提高其蛋白质利用效率的最适反应条件，包括最适酶浓度、酶解温度等 主要参数。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 木瓜蛋白酶：广西美仑生物制品有限公司，酶活力为 300万 U/g。苜蓿草粉：刈割西南 大学牧草实验室后山试验田种植的紫花苜蓿草，晾晒、烘干后粉碎为 80 目的苜蓿草粉，粗 蛋白含量为 20%；豆粕：市售豆粕，粗蛋白含量为 45.86%；酶反应底物：因苜蓿草粉含有较 多的粗纤维，添加量过多不利于单胃动物的消化吸收，故应控制苜蓿草粉在饲料中的含量。 在苜蓿草粉占饲料总量 5%的范围内，用苜蓿草粉替代 20%的豆粕，制备 18g苜蓿草粉与豆粕 的混合物，其中含有 12g 豆粕，6g苜蓿草粉。在混合物中加入 92g 三蒸水配制成酶反应底 物。 1.2 实验设计与方法 1.2.1 实验设计 1.2.1.1 加酶量对水解度的影响 在制备的酶反应底物内分别加入 0.0075g、0.015g、0.02g、0.03g 的木瓜蛋白酶，放入 65℃恒温水浴锅中进行酶解反应。反应 10h 后取出样品立即置于沸水浴中加热 10分钟，灭 活酶以终止反应。 1.2.1.2 反应温度对水解度的影响 在酶反应底物内加入 0.02g 木瓜蛋白酶，分别放入 19℃、30℃、40℃、50℃、65℃恒 温水浴锅中进行酶解反应。反应 10h 后取出样品立即置于沸水浴中加热 10 分钟，灭活酶以 终止反应。 1.2.1.3 反应时间对水解度的影响 在酶反应底物内加入 0.02g 木瓜蛋白酶，放入 65℃恒温水浴锅中分别反应 3h、5h、8h、 10h。反应过后取出样