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硕士学位论文 斑马鱼心脏发育候选基因TMP3敲除系的 建立及初步功能研究 学科专业 遗 传 学 学位类型 eq \o\ac(□,√)科学学位 □专业学位 研究生姓名 郝建军 导师姓名、职称 邓云教授 吴秀山教授 论文编号 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月 分 类 号 Q341 、Q344 密级 秘密级 学校代码 10542 学号 201202141181 斑马鱼心脏发育候选基因TMP3敲除系的 建立及初步功能研究 Generation of knockout zebrafish lines of heart candidate gene TMP3 and a preliminary study on its function 研 究 生 姓 名 郝建军 指导教师姓名、职称 邓云教授 吴秀山教授 学 科 专 业 遗传学 研 究 方 向 心脏发育的分子调控 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月 PAGE II PAGE I 摘 要 心脑血管疾病是一种严重威胁人类健康，特别是50岁以上中老年的常见病。即使应用目前最先进与完善的治疗手段，仍可有50%以上的 HYPERLINK /view/209307.htm \t /_blank 脑血管意外幸存者生活不能完全自理。全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。因此，研究心脏发育的调控基因有助于更好地了解心脏病的发病机制以及对该类疾病的防治。 心脏是脊椎动物在其胚胎发育过程中最早形成和最先具有功能的器官，心脏病又是导致人类疾病死亡的第一因素，同时，相对于其他内部器官，心脏更易于观察。因此利用模式动物系统（包括脊椎动物和非脊椎动物）研究心脏的发育成为器官发育研究的重要研究内容。 TMP3与其基因家族均在心脏和骨骼肌及平滑肌中表达。这个基因家族的表达模式在进化上是保守的，这表明TMP蛋白在心脏和骨骼肌发育过程中起重要的作用，但TMP3对心脏发育的调控尚不清楚。基因敲除动物模型是研究基因功能的有效工具，但目前国内外尚无有关建立TMP3基因敲除动物模型的报道。 本论文利用近几年兴起的TALEN打靶技术建立斑马鱼TMP3基因敲除模型。首先经网站分析筛选出TMP3基因最适合的打靶位点;其次构建出TMP3基因的左右半位点TALEN表达载体，经体外转录成RNA；将其注射至斑马鱼处于单细胞期的胚胎中。鉴定其有效性，随后对注射3月龄期的F0代鱼每一条分别通过剪尾、基因组DNA的提取、PCR扩增、酶切验证、测序结果比对，鉴定出阳性F0代嵌合体。再将F0代嵌合体与野生型鱼杂交，分别在F1代和F2代以与F0代嵌合体同样的方式进行筛选，得到斑马鱼TMP3基因的稳定敲除模型。本文还构建了TMP3-TALEN-DesRed与TMP3-TALEN-fli：GFP两种报告品系，我们对这些品系开展了进一步研究。初步的表型分析和斑马鱼M-made生理学研究技术研究结果表明：TMP3可能调控斑马鱼心脏瓣膜以及骨骼肌的发育。 关键词：心脏发育，斑马鱼，TMP基因 ，TLAEN ABSTRACT Cardiovascular disease is a serious threat to human health, especially more common when over the age of 50.Even if the application of the most advanced and comprehensive treatment,there are still more than 50% of cerebrovascular disease survivors can not completely take care of themselves.About 15 million people around the world die each year because of cardiovascular and cerebrovascular diseases and it become the first cause of death of all kinds.Therefore,the study