金属离子协同氨基酸提高重组IjI－环糊精葡萄糖基-食品与发酵工业.PDF

ki．11—1802／ts．201607001 DOI：10．13995／j．cn 金属离子协同氨基酸提高重组IjI-环糊精葡萄糖基转移酶 在枯草芽孢杆菌中的表达 李才明1’2’3，黄敏1，石建中4，顾正彪1’2’3’，洪雁1’2”，程力1’2”，李兆丰1’2’3+ l(江南大学食品学院，江苏无锡，214122)2(江南大学，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡，214122) 摘 要 随着环糊精的应用越来越广，其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC2．4．1．19，简称cGT酶)已 成为研究热点。为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(cGT)能力低等缺陷，该文将来源于日oc珊猫c讹u— h后胞外 功表达；通过对摇瓶发酵产cGT酶的条件进行优化发现，当发酵培养基为TB，pH为7．O时，37℃培养48 酶活力达到27．9u／mL，与天然菌株曰．circuf口瞄sTB0l在较优发酵条件下所分泌的胞外酶活力相比，提高了近 19倍；对TB培养基碳源、氮源进一步优化，以6g／L的玉米淀粉替代TB培养基中的甘油，以30g／L的酵母提取 物作为氮源，胞外酶活可达到31．2U／mL；亮氨酸、天冬氨酸的添加能明显促进B-CGT酶的胞外表达，而0．5 mmoL／L Fe“的添加能进一步将胞外酶活提高到36．9u／mL。这是目前报道的B·CGT酶在B．su乩订厶中胞外表 达的最高B-环化活力。 关键词 环糊精葡萄糖基转移酶；枯草芽孢杆菌；分泌表达；金属离子；氨基酸 环糊精(Cyclodextrin)，又称Schardinger糊精、环在CGT酶生产环糊精的过程中，由于天然菌产 聚葡萄糖等，是由6个及以上D．吡喃葡萄糖通过仅． CGT酶活力较低，导致了环糊精的生产成本居高不 1，4糖苷键连接而成的环状低聚物¨‘21。最常用的下，极大地限制了其工业化水平的应用，为了降低环 环糊精主要有3种，为d．、B．和1．环糊精，分别由6、7糊精的生产成本，有必要大幅提高CGT酶的产量；此 和8个葡萄糖残基分子构成，这3种环糊精又统称为 外，随着人们对食品安全问题越来越重视，提高CGT 基础环糊精∞“J。环糊精的空间结构呈中空圆筒 酶的安全性显得尤为重要。 形”o，其外部含有葡萄糖单元C．2、C．3以及c石的羟 为了克服天然菌产CGT酶能力低下这一缺陷， 基，导致外部亲水；而其内腔含有醚键氧原子以及C- 通过构建基因工程菌实现酶的胞外过量表达是行之 3和C．5上的氢原子，所以内腔疏水¨1。正因为这种 特性，使得环糊精在食品、农业、生物、医药、化工等领 达CGT酶已有诸多研究报道¨4一川，但由于在E．cD缸 域具有广泛的用途¨。10|。环糊精的工业化生产均采 表达的过程中，CGT酶易形成不溶性包涵体而使得 用酶法工艺，即在环糊精葡萄糖基转移酶(EC 其收率较低Ⅲ“…，而且E．con表达系统的安全性相 2．4．1．19，cyclodextringlucanotransferase或Cyclodex— 对较低，限制了重组CGT酶的工业化应用，尤其是在 trin glycosyltransferase，简称CGT酶)的催化作用下通 食品领域的应用。相比于E．co如表达系统，枯草芽 过环化反应转化淀粉或相关基质而生成环糊 孢杆菌表达系统是基因工程安全的宿主菌，是良好的 精¨1。‘21。根据CGT酶催化反应初始阶段所产生主 分泌型宿主，可以将异源蛋白分泌至胞外而不会形成 要环糊精的种类，可将cGT酶分为3种类型，即0【． 包涵体。因此，实现CGT酶在枯草芽孢杆菌中的克 CGT酶、B