钟基因Per2对白血病K562细胞增殖,分化,凋亡的影响及机制.docVIP

PAGE PAGE 13 钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡 的影响及机制 孙成铭1 黄世峰1 罗红伟1 刘钉宾1 田文君1 朱喜丹1 冯文莉1涂植光1温健萍2黄宗干3 (1.重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室，临床检验诊断学教育部重点实验室、重庆市重点实验室；2.Canadian Blood Services, Hamilton, ON L8S 1H8 Canada； 3.重庆医科大学临床学院血液科，重庆 400016) 摘要：目的 研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法 将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞，用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态，台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡，RT-PCR及Western blot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因P53、CyclinB1和C-myc等的表达。结果 筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞，与空载体转染组（K562/empty）及未处理对照组（K562/untreated）细胞相比，K562/Per2细胞体积缩小，但是分化不明显；台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力；流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[K562/Per2组(36.04±5.5)%, K562/empty组(12.48±2.9)%,未处理组(9.71±2.3)%, P＜0.05]，凋亡检测发现转染组细胞凋亡明显增加[14.8% P＜0.05]；电镜结果显示染色质浓集、断裂，核固缩和凋亡小体； RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调P53基因的mRNA和蛋白表达，而抑制CyclinB1、C-myc基因mRNA和蛋白的表达。结论 钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖，并诱导其发生凋亡，但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。 关键词：钟基因 增殖 凋亡 细胞周期 节律调节 中图法分类号：R733 文献标识码：A 基金项目：国家自然科学基金（No 作者简介：孙成铭，男，山东省烟台市人，博士研究生，副主任技师，主要从事白血病发病机制方面的研究。 发表论文5篇。 电话 通讯作者： HYPERLINK mailto:冯文莉，E-mail：fengwlcqmu@ 冯文莉，E-mail：fengwlcqmu@ 收稿日期：2008-5-9 修回日期：2008- Clock gene of Per2 in K562 leukemia cells, its effects on proliferation, differentiation and apoptosis and the underlying mechanisms SUN Cheng-ming1, HUANG Shi-feng1, LUO Hong-wei1，LIU Din-bing1, TIAN Wen-jun1,Zhu Xi-dan,, FENG Wen-li1,TU Zhi-guang1 ,WEN Jian-ping2, HUANG Zong-gan3 (1Department of Clinical Hematology, Key Laboratory of Laboratory Medical Diagnostics, Ministry of Education, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016， P.R.China； 2Canadian Blood Services, Hamilton, ON L8S 1H8 Canada； 3 Department of Hematology, clinic college, Chongqing Medical University, Chongqing，400016, P.R.China.) Abstract： Objective To investigate the effects of circadian clock gene Period2 (Per2) on the proliferation, differentiation and apoptosis of K562 cells and its probable molecular mechanism. Metho