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重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达和纯化
刘春凤1，张宁2，周婷2，王世媛2，陈清西*1
(1.厦门大学 生命科学学院，福建 厦门361005；
2.厦门特宝生物工程股份有限公司，福建 厦门361022)
摘要：构建含重组人转化生长因子β1基因的真核表达载体，并利用阳离子脂质体介导方法，将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中，通过MTX加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株．于14 L细胞发酵罐进行扩大培养，通过ELISA检测其表达量，表达量在3 mg/L左右．采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化，通过本纯化工艺获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97%，得率在25%以上．通过MALDI-TOF MS质谱测定rhTGF-β1的分子量为25470 Da，与理论分子量一致．N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列，测序结果与理论的氨基酸序列一致．重组人转化生长因子β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性，测定rhTGF-β1的活性为3.2×107 IU/mg，比活与RD rhTGF-β1标准品相当．本研究为进一步规模化制备生长重组人转化生长因子β1鉴定基础．
关键词：重组人转化生长因子β1；表达；纯化
中图分类号：Q 356．1 文献标识码：A
收稿日期：201
基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划），课题编号2007AA021604
*通信作者： HYPERLINK mailto:chenqx@ chenqx@
转化生长因子β（Transforming growth factors-β）是一类具有多种生物学活性的细胞因子，参与调节细胞的增殖、分化、发育和凋亡等多种生命活动[[]Lawrence DA. Latent-TGF-beta: an overview[J].Mol Cell Biochem.2001 , 219 : 163–170.]
[]Lawrence DA. Latent-TGF-beta: an overview[J].Mol Cell Biochem.2001 , 219 : 163–170.
[]Govinden R, Bhoola KD, Genealogy expression, and cellular function of transforming growth factor-beta[J]. Pharmacol Ther. 2003, 98: 257–265.
[]Abou-Shady M, Friess H, Zimmerhamm A, et al. Connective tissue growthfactor in human liver cirrhosis [ J] .Liver. 2007, 20 (2) : 296-304.
[]Lewindon PJ, Pereira TN, HoskinsAC, et al. The role of hepatic satellite cells and transforming growth factor-1 in cystic fibrosis liver disease[J].AmJ Pathol
在大多数细胞中，未成熟的TGF-β1由390个氨基酸组成，在胞内蛋白内切酶的作用下，N-端278个氨基酸形成前导肽，C-端112个氨基酸为成熟肽（图1）．TGF-β1成熟肽具有9个高度保守的半胱氨酸残基，其中8个半胱氨酸残基相互靠近，形成链内二硫键，第9个半胱氨酸形成链间二硫键，将两个单体联结在一起，构成具有生物学活性的二聚体．前导肽与成熟肽被切开后仍以非共价的形式结合，形成一种与受体不能结合的潜在复合物，需通过改变离子强度和pH进行分离，分离后的成熟肽才具有活性[[]Khalil N.
[]Khalil N. TGF-beta: from latent to active[J].Microbes Infect. 1999, 1: 1255–1263.
[6]Zhongcheng Zou,Peter DS.Overexpression of human transforming growth factor-β1 using a recombinant CHO cell expression system[ J] .Protein Expression and Purification.2004,37:265-
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