动物医学进展。.PDFVIP

动物医学进展。2009，30(6)：30—35 ProgressinVeterinaryMedicine H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立 王云龙 。，陈小科 ，韩 洁。，李玉林。，李恒思 ，王 真。，邓黎黎 。 (1．郑州职业技术学院，河南郑州 450121；2．河南省生物工程技术研究中心 ，河南郑州 450001) 摘 要 ：通过 RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒 HA基因一段靶序列，构建重组质粒作为标准阳性 模板。根据GenBank中的 H3亚型猪流感病毒 HA基因保守序列设计 了用于 F(PCR的 1对引物和 1条 TaqMan探针。通过条件优化，以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量 PCR扩增，并制作标准曲线，建 立了检测 H3亚型猪流感的荧光定量 PCR方法。结果表明，该方法检测灵敏度可达 1．0×10。拷贝／L，线性范 围为 10。～1O。，达 1O个数量级；对起始浓度为 1．0×10、1．0×10、1．0×10拷贝／L的标准品的最终实际测得 值 (Ct)分另q为 13．68，18．21和2O．57；变异系数分别为0．31 、0．17 和0．12 ，均小于5 ，说明此方法具有良 好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明，该方法的检测灵敏