细胞生物学—项—核糖体.pptVIP

第九章 核糖体(ribosome) ? 核糖体的类型与结构 ? 多聚核糖体与蛋白质的合成 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确地合成多肽链。 ? 核糖体的基本类型与成分 ? 核糖体的结构(自学，略） ? 核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 一、核糖体的基本类型与成分 ? 核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) ? 基本类型 ? 附着核糖体 ? 游离核糖体 ? 70S的核糖体 ? 80S的核糖体 ? 主要成分 ? r蛋白质：40%，核糖体表面 ? rRNA:60%,，核糖体内部 二、核糖体的结构 ? 结构与功能的分析方法 ? 蛋白质合成过程中很多重要步骤 与50S核糖体大亚单位相关 结构与功能的分析方法 ? 离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ? 纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装，显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 ? 双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中,与rRNA结合的蛋白质的类型 ? 双功能交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在结构上的相互关系 ? 电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖体的亚单位上的定位。 ? 对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 ? 70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白关系的空间模型 ?同一生物中不同种类的r蛋白的一级结构均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。 ?不同生物同一种类r蛋白之间具有很高的同源性， 并在进化上非常保守。 ? 蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性。 ? 核糖体的重组装是自我装配过程 ? 16SrRNA的一级结构是非常保守的 ? 16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure) ? rRNA臂环结构的三级结构模型 蛋白质合成过程中很多重要步骤与50S核糖体大亚单位相关 ? 涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)，核糖体上与 之相关位点称为GTPase相关位点。 ? 最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了其 空间结构高分辨率的三维图象。 ? 这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结论 ? 提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可能的作用机制， 从而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史的古老的高度复杂的分子 机器的运转奥秘迈出了极重要的一步。 三、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 ? 核糖体上具有一系列与蛋白质合成有关的结 合位点与催化位点 ? 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ? 与mRNA的结合位点 ? 与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位点，又称A位点 ? 与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位点，又称P位点 ? 肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点——E位点(exit site) ? 与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶(即延伸因子 EF-G)的结合位点 ? 肽酰转移酶的催化位点 ? 与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和终止因子的 结合位点 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 ? 核糖体蛋白 ? 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ? r蛋白质的主要功能 核糖体蛋白 ? 很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。 ? 多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。 ? 在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白的结构具有更高的保守性。 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ? 具有肽酰转移酶的活性； ? 为tRNA提供结合位点(A位点、P位点和E位点)； ? 为多种蛋白质合成因子提供结合位点； ? 在蛋白质合成起始时参与同mRNA选择性地结合以及在肽链的延伸中与mRNA结合； ? 核糖体大小亚单位的结合、校正阅读(proofreading)、无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作用等都与rRNA有关。 r蛋白质的主要功能 ? 对rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重要的； ? 在蛋白质合成中, 某些r蛋白可能对核糖体的构象 起“微调”作用； ? 在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用中, 核 糖体蛋白与rRNA共