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合格的血涂片镜检 可为疾病提供明确的诊断方向 血涂片制备 制备厚薄适宜,分布均匀,头体尾分明血涂片的关键是:依据血常规中有核细胞数量的多少 ,来调节推片角度,有核细胞数量越多,角度变小,推出来的片子就薄,细胞就容易分散,反之有核细胞数量少就要推厚一点。 涂片染色原理 目前血细胞染色一般是用瑞氏-姬姆萨染色。瑞氏染粉中的酸性染料( 曙红 )和细胞中的碱性物质结合并染成红色;其中的碱性染料(亚甲蓝)和细胞中酸性物质结合染成蓝色;姬姆萨染粉加强了天青的作用,对细胞核和寄生虫着色较好。 染色不理想见于以下几种情况 ①染色时间不当:太长,甚至干了,才去冲洗,导致片子上有大块染料沉渣,有的覆盖到细胞上;同时染色时间太长会导致核染色质收缩,舒展不开,细胞核颜色染得太深,染色质和副染色质区分不开,胞浆颗粒也染得太深,与中毒颗粒不易区分;染色时间太短,细胞未完全着色,模糊不清。②染色液和缓冲液比例不当:染色液多,缓冲液少,亦可核染色质收缩,同时片子也比较容易干(原因是甲醇比水蒸发快);反之细胞未完全着色。③ 染色液和缓冲液之间时间掌握不当:太短,对核影响大,核染色质着色不均,有成块的突起;太长,会有染料沉渣,核染色质收缩变形。④ 冲洗环节看来很简单,有的人把染液倒掉后,再慢腾腾地冲洗,这样染色液表面漂浮的染料就会附着在玻片上,留下染料沉渣。⑤ 不根据涂片厚薄,来调整染色时间。 怎样才能染出合格的片子呢? 体会 ①每次滴加染液一定要轻吹至覆盖全片(不要吹溢出玻片),这一点很重要,因为有些有诊断意义的细胞可能推到片尾或边缘。②每次染色时间一定要根据有核细胞数量的多少来调整。③要带着染液直接到自来水下冲洗。④涂片的厚薄不同,染色时间要作相应的调整。 操作 ①外周血白细胞数量在参考范围内,染色液加8滴,染10±2秒,缓冲液加24滴,染15±5分钟。 ②有核细胞增生活跃的骨髓片,染色液加8滴,染15±5秒,缓冲液加40滴,染50±5分钟。 ③脑脊液自然沉降法的玻片,染色时间要少于血片,染色液加8滴,染10±2秒,缓冲液加24滴,染10±2分钟。 ④不论是何种标本,染色时间一定要随着有核细胞数量的增多、涂片厚度增厚,而相应增加;有核细胞数量的减少、涂片的厚度变薄而相应减少。有的骨髓增生极度活跃的标本,染色液要染到20±5秒,滴加缓冲液后要染2小时。 ⑤同时还要视室温而定,室温太低,染色时间要相应延长。 要点 ①一定要根据骨髓中有核细胞数量的多数,来决定每一步的染色时间 。 ②让染色液与细胞有充分的时间接触,再加缓冲液。 ③染色液着色时间不能太长,因为甲醇挥发比水快,时间太长甲醇挥发,有染料沉渣。 甲醇的作用 甲醇是染料的溶剂。 对细胞起到固定作用 镜检 初步判断血细胞数量多少 观察血细胞形态 弥补血细胞计数仪不准确 血小板计数减少- EDTA依赖性血小板减少 白细胞计数不准确-新生儿高胆红素血症 验证网织红细胞计数 嗜多色成熟红细胞数量与网织红细胞有正相关性,血涂片染色是否理想直接影响嗜多色成熟红细胞的辨认 可以为疾病的诊断提供依据 原幼细胞-白血病 异型淋巴细胞-病毒感染 嗜多色成熟红细胞-再障、溶贫 寄生虫-疟原虫 红细胞形态-骨纤、地中海贫血、缺铁性贫血 缗钱状红细胞出现-免疫球蛋白增多 病例 * 不能照搬参考书、说明书操作,要根据有核细胞数量的多少、血涂片的厚薄来分配染色液和缓冲液比例及染色时间 *
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