谷氨酸生产菌S9114中的谷氨酸脱氢酶的研究-微生物学报.PDF

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%% !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +(,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 谷氨酸生产菌!##$ 中的谷氨酸脱氢酶的研究 ， ! $ ! ! ! ! 王 燕 宋 香 杨平平 段作营 毛忠贵 ! （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，无锡 $!3%# ） $ （山东轻工业学院食品工程系，济南 $2%!%% ） 摘 要 谷氨酸脱氢酶（ ）是谷氨酸生物合成的关键酶，谷氨酸棒杆菌 是目前我国味精工业应用最广泛的 ABC D !!3 生产菌种，其谷氨酸脱氢酶的研究尚未见报道。分离纯化该菌中的谷氨酸脱氢酶，研究其辅酶组成，对揭示谷氨酸 脱氢酶的分子结构和性质，提高谷氨酸产率很有必要。将培养至对数期中期的细胞离心收集并用含适量 、 B55 :B1 的 缓冲液 （ ）洗涤，用 破碎，离心去除菌体碎片得无细胞抽提液。然后使 5E 50;F1CG) ?C 6 H2 70-I@J ?0-FFK0- @-)) ?0-FF 用 快速纯化系统经 纤维素柱、疏水柱（ ）、 凝胶过滤柱层析得到纯化大约 倍的以 LM5E1!%% B:E:1 CNG A1$%% 6% +EB1 为辅酶的 和部分纯化的以 辅酶的 。这两个酶分别对 、 高度专一，不能相互代替。 OC ABC +EBC ABC +EBOC +EBC 经COPG 和DBD1OEA: 测得前一种酶的分子量和亚基分子量分别为 !44QB 和$QB，表明该酶为具有相同亚基的六 聚体。酶活性测定使用 分光光度计利用 （） 在 氧化的初速度进行。蛋白质含量测定 CN5EGCN R1%%% +EB O C 3%I. 利用 方法进行，并以牛血清白蛋白为标准蛋白。纯化结果表明 中确实存在两种 ，其中以 为 S08TU(0T D ABC +EBC !!3 辅酶的 尚未