细胞因子的检测类型与作用特点.ppt

第三节 常用细胞因子的检测方法 一、IL-2的检测 二、IFN-γ的检测 三、TNF的检测 待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2） 按不同稀释度加入 37oC，16-20小时 加入3HTdR（1-5?Ci） 37oC，4-6小时 收集细胞 测定 白细胞介素-2的测定示意图 待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929） 按不同稀释度加入 37oC，4小时 37oC，24-48小时 弃取上清，加入VSV 观察细胞病变（镜检或比色） 干扰素的测定示意图 肿瘤坏死因子的测定示意图 待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929） 按不同稀释度加入 37oC，24小时 弃取上清，洗涤 加入结晶紫染液，洗涤 加入细胞裂解液，比色 第四节 细胞因子受体的检测 一、细胞因子受体的类型 二、细胞因子受体的检测 细胞因子受体的类型 膜型细胞因子受体 分泌型细胞因子受体 细胞因子受体的检测方法 膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法 分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法 本章小结 1、细胞因子的作用特点与检测特点 2、细胞因子检测的原理与方法 3、常用的细胞因子检测 4、细胞因子受体的检测 * 第一节 细胞因子检测概述 一、细胞因子的类型与作用特点 二、细胞因子检测的特点与方法 由非神经—内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。 细胞因子 细胞因子的类型与作用特点 1、细胞因子的分类 2、细胞因子的作用特点 以生物学作用进行划分的分类 白细胞介素（Interleukin）—— IL-1、IL-2、…… IL-18 干扰素（Interferon）—— IFN-?、IFN-?、IFN-? 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）—— TNF- ?、 TNF- ? 集落刺激因子（Colony-stimulating factor）—— M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor）—— TGF- ? 趋化因子（Chemokine）—— IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth factor）—— EGF、FGF、IGF、PDGF TNFs ILs IFNs TGFs Chemokines CSFs 各类细胞因子间关系 1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性 细胞因子 细胞因子 细胞因子受体 细胞因子受体 细胞因子的自分泌与旁分泌性 I L-2 I FN-? TNF-? 细胞因子的同源性与多源性 I FN-? T细胞 T细胞 NK细胞 IL-4 Th细胞 肥大细胞 Th细胞 B细胞 细胞因子的多效性 Th细胞 B细胞 细胞因子的丰余性 IL-2 IL-4 IL-5 Th细胞 B细胞 细胞因子的协同性 IL-4 IL-5 Th2细胞 B细胞 细胞因子的拮抗性 Th1细胞 IL-4 I FN-? 细胞因子的网络性 IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、 GM-CSF TNF TGF IL-1 IFN IL-1 IFN TNFIL-1 TGF IFNIL2 IL-4 IFN IL2 IL-4 IL-5 IL-6 TNF IFN IL-1 TGF TNF IL-1 IFN IL-5 GM-CSF G-CSF M-GSF TNF TNF IL-1 TGF IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IL-1 IL-6 IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IFN 内皮细胞 成纤维细胞 T B 细胞因子检测的特点与方法 1、检测的特点 2、检测的方法 细胞因子检测的特点 免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差 细胞因子检测的方法 免疫学检测方法——抗原性检测 细胞生物学检测方法——生物活性检测 分子生物学检测方法——基因表达检测 第二节 细胞因子检测的方法与原理 一、细胞因子的细胞生物学检测 二、细胞因子的免疫学检测 三、细胞因子的分子生物学检测 细胞因子的细胞生物学检测 1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点 检测方法与原理 细胞增殖或增殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验 滤膜：计数受趋化细胞 趋化因子 细胞 趋化试验原理示意 检测中的操作注意要点 靶细胞的选择与培养 检测标本的制备 显示检测结果