细胞因子与细胞粘附因子的测定方法.ppt

* * 名词解释或简答题。特定的生物学活性是指：如刺激细胞增殖活性、维持细胞生长和存活活性、溶解和杀灭细胞活性、抗病毒活性、促进细胞趋化性、刺激细胞生成集落活性等 * 名词解释 * * * * * * 细胞病变效应（CPE）：指病毒在体外细胞培养时引起的细胞损害 。 * 复杂，不讲这个幻灯了。 * * * * * 填空题 * * * 后续反应：待测细胞分泌细胞因子后，洗涤去除未结合于固相的细胞，然后加入相应的酶标抗特定细胞因子的抗体，反应后洗板，加入酶标底物显色测定，显色深浅与结合于固相细胞内细胞因子成正比，并可在光学显微镜下观察分泌细胞因子细胞。 * * * PCR-SSCP：单链构象多态性分析； PCR-RFLP：限制性片段长度多态性分析。 * * * * 原因：一般情况下，细胞因子在血循环和体液内浓度很低，只有在特定的病理情况下入炎症、肿瘤等，由于免疫刺激使细胞因子分泌增加，才能在血液或体液中检出。 * * * 滤膜：计数受趋化细胞 趋化因子 靶细胞 趋化试验原理示意 各类细胞因子检测的常用靶细胞-1 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法 IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4 IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPO IL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2 IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4 各类细胞因子检测的常用靶细胞-2 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒细胞（M、H）趋化法 GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5 TNF?/? L929 （M、H）细胞毒法 IFN? wish（H）病变保护法 IFN- ?、 IFN- ? L929（M）病变保护法 IFN- ?、 IFN- ? 五、生物学活性测定方法学评价 优点 生物学活性的测定 灵敏度高 缺点 特异性差 操作繁琐 易受干扰 第二节 免疫学测定法 细胞因子(或受体)与相应的特异性抗体( 单克隆抗体或多克隆抗体)结合，通过同位素、荧光或酶等标记技术加以放大和显示， 从而定性或定量显示细胞因子(或受体)的水平。 根据抗体性质和特异性不同，夹心法ELISA可分为： 1. PcAb与McAb夹心法 2. McAb与PcAb夹心法 3. 双McAb夹心法 4. 细胞、McAb夹心法 一、ELISA方法 ELISA法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，一步或多步的