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PAGE PAGE 1 附件 浙江大学宁波理工学院 《微生物育种学》 课程论文 题目 普那霉素生物合成机理及 基因工程研究进展 姓名 金庆超 学号 ******* 分院 生物与化学工程分院 专业班级 ******** 任课教师 金庆超 完成日期 2008年6月9日  摘要 普那霉素(Pristinamycin)由始旋链霉菌 (Streptomyces pristinaespiralis)产生，包含普那霉素I (PI) 和普那霉素II (PII) 两类化合物，主要用于治疗由包括耐药菌在内的革兰氏阳性菌引起的感染。目前，缺乏稳定遗传的高产菌株是制约普那霉素发酵生产和临床应用的主要原因之一，其中利用基因工程的方法筛选高产菌株成为重要的研究热点，本文就此方面进行了简要介绍。 关键词：始旋链霉菌；普那霉素；高产；分子机理；分子育种  1. 前言 普那霉素（pristinamycins）属链阳性菌素类（streptogramin）抗生素, 由始旋链霉菌（Streptomyces pristinaespiralis）产生，具有抑制生物蛋白合成的杀菌活性(1)。该类抗生素主要由普那霉素I (PI)和普那霉素II (PII)等两类化合物组成，其含量分别为30％和70％。普那霉素I为环六肽内酯（branched cyclic hexadepsipeptides），由普那霉素IA(含量约90-95%)、普那霉素IB(约5%)和普那霉素IC(约1%)组成；普那霉素II为多不饱和环内酯(polyunsaturated macrolactones) ，由普那霉素IIA(约80%)和普那霉素IIB(约20%)组成。普那霉素IA和普那霉素IIA是普那霉素的主要组分(1;2)。 2. 普那霉素的生物合成基因 2.1 普那霉素I的生物合成基因 普那霉素IA的分子骨架是由1个3-羟基吡啶羧酸(3-hydroxypicolinic acid chromophore)残基和L-苏氨酸(L-threonine)、D-氨基丁酸(L-aminobutyric acid)、L-脯氨酸(L-proline)、4-二甲基氨基-L-苯丙氨酸(4-dimethylamino-L-phenylalanine，L-DMPAPA)、4-酮-L-六氢吡啶羧酸(4-ketone-pipecolic acid)和L-苯甘氨酸(L-phenylglycine)等6个氨基酸残基聚合而成的环状结构。PIA大环的第5位的L-DMPAPA残基被4-甲基氨基-L-苯丙氨酸(4-methylamino-L-phenylalanine，L-MMPAPA)残基替换就形成PIB, 而PIB的第3位D-氨基丁酸残基被D-丙胺酸（D-alanine）残基替换后又形成PIC分子。 一般而言，PI的生物合成大体上可以分成三个过程：前体的形成，环六肽内酯的合成和大环的修饰，期间需要大量基因参与。目前仅克隆到了组成PI大环的第5位L-DMPAPA残基的生物合成相关基因（图1）。该生物合成途径以分支酸(chorismic acid)为起始底物，在由基因papA、papB、papC和papM编码的谷酰胺氨基转移酶(glutamine aminotransferase)、4-氨基-L-苯丙氨酸(4-amino-L-phenylalanine synthase)、变位酶(mutase)、脱氢酶(dehydrogenase)和甲基化酶(methylase)等酶的参与下完成，其产物L-MMPAPA和L-DMPAPA作为前体物质分别参与PIB和PIA大环的合成(3)。 PI环六肽内酯的生物合成主要在肽合成酶（peptide synthetase）的催化作用下聚合成肽链(4)。目前已分离出催化PI大环合成的PI合成酶1、2和3的编码基因snbA、snbC和snbDE（图2）。这三种酶依次激活PI大环的1(3-羟基吡啶羧酸)、2－3 (L-苏氨酸和D-氨基丁酸)和4－7位点氨基酸(L-脯氨酸、4-二甲基氨基-L-苯丙氨酸、4-酮-L-六氢吡啶羧酸和L-苯甘氨酸)，合成PIA的前体分子PIE大环(5;6)。基因snbF的产物催化第6位L-六氢吡啶羧酸残基的羟化反应修饰PIE大环形成最终的PIA（图3）(6)。基因snbC和snbDE还能激活D-丙胺酸和L-MMPAPA分别连接到PI大环的第三位和第五位，进而形成组分PIC和PIB (5;6)。 2.2 普那霉素II的生物合成基因 普那霉素IIA由7个乙酸单位、4种氨基酸残基（缬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、脯氨酸）、来自丝氨酸的噁唑环和来自甲硫氨酸的甲基等组成。迄今为止，尚不明确与PII前体的生物合成相关的功能基因。已鉴定出一个与PIIB环生物合成的相关基因snaD，该基因编码的非核糖体肽合成